[發明專利]一種用于增強siRNA遞送的多功能脂質體的制備方法

在審

• 申請號: 202010417105.2
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111450261A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 謝晶;趙雅蓉;張歡;畢野
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/64;A61K31/7088;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種用于增強siRNA遞送的多功能脂質體的制備方法，包括以下步驟：

1）采用乙醇稀釋法制備多功能脂質體

將卵磷脂和膽固醇作為輔助脂質摻入脂質體中，并使用陽離子脂質與改性穿膜肽混合制備脂質體；

制備處方為陽離子磷脂20%~30%，改性穿膜肽15%~25%，卵磷脂 18%，膽固醇 35%，聚乙二醇2%，在乙醇中溶解后按照比例混合均勻后，采用透析法除去乙醇，透析液為pH 7.2~7.4緩沖液，室溫透析2~3小時后，取出脂質體；

在馬爾文激光粒度分析儀上測定粒徑和Zeta電位；

2）按照多功能脂質體的制備處方進行siRNA和轉鐵蛋白的加載

魚精蛋白和siRNA分別用檸檬酸鹽緩沖液溶解；按照優化后的摩爾比在乙醇溶液加入陽離子磷脂，改性穿膜肽，卵磷脂，膽固醇和聚乙二醇，混合均勻后，將混合液與魚精蛋白溶液混合，渦旋30~50秒；然后將 siRNA 溶液滴加至上述混合液中，渦旋20~30秒；

采用透析法除去乙醇和游離的siRNA，室溫透析2~3小時后，取出脂質體；

在上述脂質體中加入轉鐵蛋白-膽固醇，37攝氏度孵育1小時，制備載siRNA的改性穿膜肽與轉鐵蛋白雙修飾的多功能脂質體。