[發明專利]一種高純度石榴皮亭A的制備方法

有效

• 申請號: 202010415738.X
• 申請日: 2020-05-16
• 公開（公告）號: CN111533768B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 阿吉艾克拜爾·艾薩;孫光映;古麗契熱·阿地力;木尼熱·阿布都艾尼;趙永昕
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆理化技術研究所
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H13/10
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

1.一種高純度石榴皮亭A的制備方法，其特征在于分別使用甲醇和甲酸水的混合物作為流動相、使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作為流動相或使用乙腈和甲酸水的混合物作為流動相，具體操作按下列步驟進行：

使用甲醇和甲酸水的混合物作為流動相：

a、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在30℃，流速控制在180 mL/min，將甲醇和甲酸含量為0.1%的甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中甲醇含量20%，平衡色譜柱至基線水平，稱取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，離心除去沉淀，進樣至高效液相色譜儀進行分離，接取石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度40℃下濃縮成5 mL，真空冷凍干燥成黃色固體粉末230 mg；

b、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在7- -30℃，流速控制在0.3-2.4 mL/min，將甲醇和甲酸含量為0.05-1.0%甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中甲醇含量控制在15-50%，平衡色譜柱至基線水平，稱取步驟a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40 mg，溶于1 mL流動相中，進樣至色譜柱進行低溫分離，分別接取石榴皮亭A的第一個峰和第二個峰，接取包含有石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1mL流動相溶解，待用；

c、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在7℃- -30℃，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，將甲醇和甲酸含量為0.05-1.0%甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中甲醇含量控制在15%-50%，平衡色譜柱基線水平，將步驟b中所得包含第一個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第二個峰，將步驟b中所得包含第二個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第一個峰，合并這兩次實驗的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1 mL流動相溶解，待用；

d、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7ml/min，將乙腈和甲酸含量為0.05-1.0%甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色譜柱至基線水平，將步驟c中所得組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮至1 mL，真空冷凍干燥，得到高純度石榴皮亭A淡黃色粉末，用高效液相色譜儀鑒定其純度；

使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作為流動相：

a、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在30℃，流速控制在180 mL/min，將甲醇和甲酸含量為0.1%的甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中甲醇含量20%，平衡色譜柱至基線水平，稱取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，離心除去沉淀，進樣至高效液相色譜儀進行分離，接取石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度40℃下濃縮成5 mL，真空冷凍干燥成黃色固體粉末230 mg；

b、調整DAD檢測器波長為254 nm和366 nm，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，柱溫控制在7℃- -30℃，將甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通過高效液相色譜儀泵混合作為流動相，其中甲醇的含量控制在15-40%，乙腈的含量控制在5-15%，甲酸水的含量控制在55-80%，平衡色譜柱至基線水平，稱取步驟a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40mg，溶于1 mL流動相中，進樣至色譜柱進行低溫分離，分別接取石榴皮亭A的第一個峰和第二個峰，接取包含有石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1 mL流動相溶解，待用；

c、調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，流速控制在0.3-2.4 mL/min之間，柱溫控制在7℃- -30℃，將甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通過高效液相色譜儀泵混合作為流動相，其中甲醇的含量控制在15%-40%，乙腈的含量控制在5%-15%，甲酸水的含量控制在55%-80%，平衡色譜柱至基線水平，將步驟b中所得包含第一個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第二個峰，將步驟b中所得包含第二個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第一個峰，合并兩次實驗的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1 mL流動相溶解，待用；

d、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7/min，將乙腈和甲酸含量為0.05-1.0%甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色譜柱至基線水平，將步驟c中所得組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮至1 mL，真空冷凍干燥，得到高純度石榴皮亭A淡黃色粉末，用高效液相色譜儀鑒定其純度；

使用乙腈和甲酸水的混合物作為流動相：

a、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在30℃，流速控制在180 mL/min，將甲醇和甲酸含量為0.1%的甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中甲醇含量20%，平衡色譜柱至基線水平，稱取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，離心除去沉淀，進樣至高效液相色譜儀進行分離，接取石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度40℃下濃縮成5 mL，真空冷凍干燥成黃色固體粉末230 mg；

b、調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，柱溫控制在7℃- -2℃，將乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通過高效液相色譜儀泵混合作為流動相，其中乙腈的含量控制在10-30%，甲酸水的含量控制在70-90%，平衡色譜柱至基線水平，稱取步驟a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40 mg，溶于1 mL流動相中，進樣至色譜柱進行低溫分離，分別接取石榴皮亭A的第一個峰和第二個峰，接取包含有石榴皮亭A的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1 mL流動相溶解，待用；

c、調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，流速控制在0.3-2.4 mL/min，柱溫控制在7℃- -2℃，將乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通過高效液相色譜儀泵混合作為流動相，其中乙腈的含量控制在10%-30%，甲酸水的含量控制在70%-90%，平衡色譜柱至基線水平，將步驟b中所得包含第一個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第二個峰，將步驟b中所得包含第二個峰的組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A的第一個峰，合并兩次實驗的組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮干燥，加1 mL流動相溶解，待用；

d、將反相C18色譜柱連接在配有雙通道紫外檢測器的高效液相色譜儀上，調整高效液相色譜儀波長為254 nm和366 nm，將柱溫控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7/min，將乙腈和甲酸含量為0.05-1.0%甲酸水通過高效液相色譜儀的溶劑泵混合作為流動相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色譜柱至基線水平，將步驟c中所得組分，進樣至色譜柱進行低溫分離，接取石榴皮亭A組分，用旋轉蒸發儀在溫度30-50℃下濃縮至1 mL，真空冷凍干燥，得到高純度石榴皮亭A淡黃色粉末，用高效液相色譜儀鑒定其純度。