[發(fā)明專利]一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010414898.2
• 申請日: 2020-05-15
• 公開（公告）號: CN111549093A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金超;趙令銨;王璐婷;舒龍飛
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N21/31
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務(wù)所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于該方法按以下步驟進行：

一、挑取含有阿米巴孢子的培養(yǎng)基，然后采用磷酸鹽緩沖液進行稀釋，分別稀釋1倍、2倍、5倍、10倍、20倍、40倍、50倍、100倍、200倍、500倍，獲得不同濃度的阿米巴孢子液；

二、采用血球計數(shù)板計數(shù)法，將步驟一獲得各濃度阿米巴孢子液進行精確計數(shù)測量，每種濃度重復(fù)測量3～5次，計算平均值即為各濃度阿米巴孢子液中阿米巴孢子量C；

三、采用紫外可見分光光度計分別測定步驟一獲得各濃度阿米巴孢子液吸光度A；測定波長為250nm～265nm；

四、以步驟二獲得的各濃度阿米巴孢子液中孢子量C為橫坐標，以步驟三獲得的各濃度阿米巴孢子液的吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，獲得線性回歸方程y＝ax+b，其中y為不同濃度阿米巴孢子液的吸光度A，x為不同濃度的阿米巴孢子液中孢子量C，單位為個/mL，并根據(jù)步驟二和步驟三中已測得的數(shù)據(jù)，計算得出a和b的值；

五、將含阿米巴孢子的待測樣品稀釋，獲得稀釋阿米巴孢子液；

六、采用紫外可見分光光度計測定步驟五獲得的稀釋阿米巴孢子液的吸光度；

七、通過步驟六獲得的吸光度，利用步驟四獲得的線性回歸方程計算步驟五獲得的稀釋阿米巴孢子液中的阿米巴孢子量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟一中稀釋后阿米巴孢子液中阿米巴孢子量為10⁵～10⁷個/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟一磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀和氫氧化鈉的混合溶液，pH為7，其中磷酸二氫鉀的濃度為0.0068g/mL，氫氧化鈉的濃度為29.1mol/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟二血球計數(shù)板計數(shù)法采用25格×16格計數(shù)板或16格×25格計數(shù)板。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟三在測定前，采用步驟一所述的磷酸鹽緩沖液校準分光光度計基線。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟三中測定波長為250nm、255nm、260nm或265nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟五中采用步驟一所述的磷酸鹽緩沖液對含阿米巴孢子的待測樣品稀釋。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟五中獲得稀釋阿米巴孢子液中阿米巴孢子量為10⁵～10⁷個/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法，其特征在于步驟六在測定前，采用步驟一所述的磷酸鹽緩沖液校準分光光度計基線，且測定波長采用步驟三檢定吸光度時的測定波長。

10.如權(quán)利要求1所述的一種水中阿米巴孢子的快速計數(shù)方法的應(yīng)用，其特征在于該方法作為檢測手段應(yīng)用在檢測過濾介質(zhì)對阿米巴孢子的截流過濾效果中。