[發明專利]快速鑒別貓腸道冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒的HRM引物對、試劑盒及方法在審
| 申請號： | 202010414528.9 | 申請日： | 2020-05-15 |
| 公開（公告）號： | CN111518955A | 公開（公告）日： | 2020-08-11 |
| 發明（設計）人： | 叢鋒;肖麗;黃碧洪 | 申請（專利權）人： | 廣東省實驗動物監測所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣州本諾知識產權代理事務所(普通合伙) 44574 | 代理人： | 朱彩霞 |
| 地址： | 510700 廣東省廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 快速 鑒別 腸道 冠狀病毒 傳染性 腹膜炎 病毒 hrm 引物 試劑盒 方法 | ||
1.一種快速鑒別貓腸道冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒的HRM引物對，其特征是，所述引物對上、下游引物序列分別如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
2.如權利要求1所述的HRM引物對，其特征是，所述引物對根據FCOV全長基因29 000bp至29 500bp之間的序列設計得到的。
3.一種快速鑒別貓腸道冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒的HRM試劑盒，其特征是，所述試劑盒包含權利要求1所述的引物對。
4.如權利要求3所述的HRM試劑盒，其特征是，還包括酶、熒光染料及其他HRM反應所需試劑。
5.如權利要求4所述的HRM試劑盒，其特征是，所述的HRM試劑盒，還包括陰性對照和陽性對照；所述陰性對照為無RNase的水空白對照品；所述陽性對照為FECV陽性樣品和FIPV陽性樣品。
6.一種用于鑒別貓腸道冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒的方法，其特征是，步驟如下：
(1)提取待測樣本RNA作為模板；
(2)用權利要求1所述的引物對進行RT-PCR擴增；
(3)根據熒光信號進行HRM分析即可快速鑒別貓腸道冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒；
所述方法用于非疾病診斷及治療用途。
7.如權利要求6所述方法，其特征是，所述步驟(2)RT-PCR反應體系共25μl：RNA 2μl，PrimerScript 1 step Enzyme 1μl，2×step Buffer 12.5μl，RNase Free ddH2O 5.5μl，上游引物1μl，下游引物1μl，熒光染料LC GREEN 2μl。
8.如權利要求6所述方法，其特征是，所述步驟(2)RT-PCR反應程序為50℃30min，95℃2min，95℃預變性30s，95℃10s，55℃20s，72℃30s，35個循環，72℃5min，4℃30min。
9.如權利要求6所述方法，其特征是，所述步驟(3)HRM分析：75℃～88℃，以0.1℃/步的升溫速率、每0.05s收集一次熒光進行溶解曲線分析。
10.權利要求1所述HRM引物對在制備檢測及鑒別區分FECV和FIPV的藥物中的應用。
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