[發(fā)明專利]一種ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法、試劑盒及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010414079.8
• 申請(qǐng)日: 2020-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN111562378A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 代麗萍;王猛;劉峰輝;歐陽松云;王雨林;趙春玲;劉曼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法，其特征在于，所述ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法包括：

包被液配制：1.5g Na₂CO₃，2.9g NaHCO₃，800ml去離子水加去離子水定容至1L；

10XPBST洗液配制：81.8g NaCl，28.8g Na₂HPO₄·12H₂O，3.1g NaH₂PO₄·12H₂O，0.1g硫柳汞鈉，800ml去離子水，5ml Tween20，200ul proclin300，加去離子水定容至1L；

1X PBST洗液配制：100ml 10X PBST洗液，加去離子水定容至1L；

封閉液配制：2g BSA溶解于100ml 1X PBST洗液；

抗體稀釋液配制：1g BSA溶解于100ml 1X PBST洗液或者將50ml封閉液用1X PBST稀釋一倍；

McIvain`s buffer配制：量取234ml 0.2M Na₂HPO₄和266ml 0.1M檸檬酸，混勻；

顯色液配制：量取2ml 10mg/ml ABTS、18ml McIlvain`s緩沖液和0.1ml 30％H₂O₂，混勻；

磷酸鹽緩沖液配制：稱取5.68g Na₂HPO₄、1.56g NaH₂PO₄·H₂O，溶解于80ml去離子水中，調(diào)pH后加去離子水至100ml。

2.如權(quán)利要求1所述ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法，其特征在于，所述包被液1L配制中去離子水pH9.6；

10XPBST洗液1L配制中去離子水pH7.4。

3.如權(quán)利要求1所述ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法，其特征在于，封閉液配制中，封閉液為100ml，2％BSA；

抗體稀釋液配制中，抗體稀釋液為100ml，1％BSA。

4.如權(quán)利要求1所述ELISA檢測(cè)試劑盒的構(gòu)建方法，其特征在于，McIvain`s buffer配制中，Na₂HPO₄和檸檬酸混合后調(diào)pH至4.6；

0.5M磷酸鹽緩沖液配制中，pH7.4，100ml；Na₂HPO₄、NaH₂PO₄·H₂O，溶解于去離子水中，調(diào)pH至7.4。

5.一種利用權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述構(gòu)建方法構(gòu)建的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述ELISA檢測(cè)試劑盒包括：包被液、包被重組純化EGFR蛋白的96孔酶標(biāo)板、PBST洗液、封閉液、抗體稀釋液、顯色液、McIvain`s buffer液、磷酸鹽緩沖液。