[發(fā)明專(zhuān)利]CS/HPMCP納米微粒在口服疫苗遞送中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010413064.X
• 申請(qǐng)日: 2020-05-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111544583A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖書(shū)奇;李志偉;馬志倩;李爽
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/215
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/215;A61P31/14;A61K9/51;A61K47/38;A61K47/36;C12N15/70;C12N15/50
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

1.CS/HPMCP納米微粒在口服疫苗遞送中的應(yīng)用，其特征在于，具體步驟如下：

(1)構(gòu)建目的基因原核表達(dá)載體，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)純化，獲得純化的目的蛋白；

(2)制備CS/HPMCP/蛋白復(fù)合納米微粒：CS與HPMCP的質(zhì)量比為0.7：1，殼聚糖的濃度為2mg/ml，HPMCP濃度為4mg/ml，醋酸濃度為0.5mol/L，殼聚糖溶液的pH為5.5；在磁力攪拌器轉(zhuǎn)速為400rpm條件下，將HPMCP溶液和目的蛋白溶液混合后逐滴加入到殼聚糖溶液中，攪拌時(shí)間為10min，制備得到CS/HPMCP/蛋白復(fù)合納米微粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CS/HPMCP/蛋白復(fù)合納米微粒在制備疫苗中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CS/HPMCP納米微粒在口服疫苗遞送中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(1)構(gòu)建PEDV COE原核表達(dá)載體，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)純化，獲得純化的COE蛋白，步驟如下：

①擴(kuò)增PEDV COE基因，引物序列如下：

PEDV-SX-COE-F：5’-TCGGATCCGTTACTTTGCCATCATTTAATG-3’；SEQ ID NO.1；

PEDV-SX-COE-R：5’-TGCTCGAGAACGTCCGTGACACCTTC-3’；SEQ ID NO.2；

②利用酶切位點(diǎn)BamHI和Xho I將PEDV COE基因克隆到pET-32a原核表達(dá)載體中，獲得pET-32a-COE；

③將測(cè)序正確的pET-32a-COE質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，加入終濃度為1mmol/L的IPTG，誘導(dǎo)表達(dá)3-4h，獲得純化的COE蛋白。

4.CS/HPMCP/COE蛋白復(fù)合納米微粒在制備預(yù)防豬流行性腹瀉疫苗中的應(yīng)用。