[發(fā)明專利]一種監(jiān)測煙草霉變的預(yù)處理及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010410181.0
• 申請日: 2020-05-15
• 公開（公告）號: CN111398492A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉玉英
• 申請（專利權(quán)）人: 葉玉英
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 長沙大珂知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43236
• 代理人: 孫雪梅

本發(fā)明屬于煙草成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及煙草加工中，監(jiān)測煙草及煙草制品中苯并芘的預(yù)處理及檢測方法。本發(fā)明采用芳香醇苯甲醇作為溶劑，利用固相萃取柱中對樣品進(jìn)行預(yù)處理，發(fā)現(xiàn)樣品溶液在固相萃取柱分離時效果好，克服了煙草及煙草制品基質(zhì)的復(fù)雜性，干擾因素多的問題，對于含量相對較少的苯并芘在上述樣品也能實現(xiàn)準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度等指標(biāo)均能達(dá)到較好效果，為標(biāo)準(zhǔn)化檢測提供了有效的途徑。此外，本發(fā)明還提供了一種檢測煙草霉變的檢測方法，該方法系統(tǒng)適用性和專屬性均良好，能快速的對煙草中苯并芘進(jìn)行檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于煙草成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體的本發(fā)明涉及煙草加工中，監(jiān)測煙草及煙草制品中苯并芘的預(yù)處理及檢測方法。

技術(shù)背景

煙草及相關(guān)制品在儲存、運輸和加工過程中均有可能會產(chǎn)生黃曲霉毒素，即二氫苯并呋喃和苯并芘，該兩者都是芳族雜環(huán)化合物，相對穩(wěn)定。

苯并芘是一種公認(rèn)的強致癌化合物，是多環(huán)芳烴中毒性最大的一種，被國際癌癥研究中心列為2A類致癌物。可以通過呼吸、攝入和接觸等途徑進(jìn)入人體，可損傷生殖系統(tǒng)，易導(dǎo)致皮膚癌、肺癌、上消化道腫瘤、動脈硬化和不育癥等疾病，其具有如下結(jié)構(gòu)式：

由于煙草及煙草制品基質(zhì)的復(fù)雜性(共含有超過8000種化合物)，再加上苯并芘在上述樣品中的含量有可能較低，因此需要一種能夠定量準(zhǔn)確、除雜能力強的測定方法。

中國專利CN104678039B公開了一種基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定煙草及煙草制品中四種黃曲霉毒素含量的方法，該方法實現(xiàn)了對四種黃曲霉毒素的同時測定。但是煙草及煙草制品中苯并芘的含量極低，上述方法的檢測限較高，并且檢測結(jié)果受操作條件及儀器的影響較大，因此上述方法不能對煙草及煙草制品中黃曲霉毒素進(jìn)行很好的定量。

因此，有必要開發(fā)出一種有效的方法對煙草及煙草制品進(jìn)行預(yù)處理，降低煙草及煙草制品中復(fù)雜的其它化合物的干擾，簡單準(zhǔn)確的檢測出苯并芘的含量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種煙草監(jiān)測霉變的預(yù)處理及檢測方法，采用本發(fā)明提供的新的預(yù)處理方法及檢測，可實現(xiàn)對苯并芘進(jìn)行檢測分析，有效監(jiān)測煙草及煙草制品中苯并芘含量。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種監(jiān)測煙草霉變的預(yù)處理方法，所述預(yù)處理方法包括以下步驟：

步驟一：將待檢測的樣品進(jìn)行粉碎，按照質(zhì)量比1:2～1:4加入苯甲醇進(jìn)行溶解，渦旋萃取5～10分鐘，進(jìn)行離心分離，取上清液，過濾，得連續(xù)液；

步驟二：采用固相萃取柱活化：依次用苯甲醇、水預(yù)洗；

步驟三：將步驟一中得到的連續(xù)液溶加至固相萃取柱上，依次用苯甲醇溶液、苯甲醇-水-石油醚體積比為70：10：20的溶液進(jìn)行洗脫，棄去洗脫液，繼用苯甲醇溶液洗脫，收集洗脫液；

步驟四：將步驟三中的收集的洗脫液，水浴揮干溶劑，再用苯甲醇復(fù)溶作為待測液，預(yù)處理完成。

進(jìn)一步，所述步驟1中待檢測樣品與苯甲醇的質(zhì)量比為1:4，渦旋萃取5分鐘。

進(jìn)一步，所述步驟二中依次采用苯甲醇與水的體積比為70:30。

基于上述同一個發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明的另一個目標(biāo)是提供一種煙草霉變檢測方法，所述方法包括將完成預(yù)處理的待測液作為供試品，流動相A為乙酸銨溶液、流動相B為甲酸乙腈混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，采用SPE-UPLC法對苯并芘含量進(jìn)行檢測。優(yōu)選的流動相B甲酸與乙腈的體積比為70:30。

進(jìn)一步，所述流動相A和流動相B的按照下表進(jìn)行梯度洗脫：