[發(fā)明專利]無異源培養(yǎng)基及使用其擴增間充質干細胞的方法

在審

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• 申請日: 2020-05-14
• 公開（公告）號: CN113667635A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設計）人: 鄺緯陽;鐘樹根
• 申請（專利權）人: 夢芊科技知識產(chǎn)權有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 王冬;韓威威

本發(fā)明涉及一種無異源培養(yǎng)基及使用其擴增間充質干細胞的方法。具體而言，本發(fā)明提供一種無異源培養(yǎng)基，其包含基礎培養(yǎng)基和至少50ng/mL的成纖維細胞生長因子。本發(fā)明還提供一種培養(yǎng)基補充制劑，其包含成纖維細胞生長因子，其中所述成纖維細胞生長因子的含量使得在添加至基礎培養(yǎng)基后以至少50ng/mL的濃度存在，例如80?150ng/mL，如約100ng/mL。本發(fā)明還提供一種使用本發(fā)明的無異源培養(yǎng)基或培養(yǎng)基補充制劑擴增間充質干細胞的方法。

技術領域

本公開一般地涉及無異源培養(yǎng)基，更具體地涉及用于擴增充質干細胞的培養(yǎng)基和方法。

背景技術

干細胞是一組未分化的細胞，能夠通過細胞分裂和分化再生體細胞。在干細胞譜系中，人間充質干細胞(hMSC)是可以從諸如骨髓、脂肪組織和羊水等人體組織中分離出來的成體干細胞。

由于具有高可及性、增殖潛力、固有的免疫調節(jié)和修復特性以及多分化能力[1-4]，hMSC已被廣泛用作干細胞治療、組織工程[5,6]、藥物發(fā)現(xiàn)[3,4,7]和疾病建模[8,9]的可靠細胞來源。易于從骨髓、脂肪組織、羊水(AF)、臍帶和胎盤中方便和直接地獲得hMSC，用于細胞擴增的種子培養(yǎng)[1,10]。盡管許多研究人員已經(jīng)證實了hMSC的治療潛力，但是為了充分滿足不斷增長的臨床需求，挑戰(zhàn)仍然在于穩(wěn)定和可放大的細胞擴增。干細胞分化能力和潛能的低一致性維持以及昂貴的干細胞培養(yǎng)阻礙了hMSC在當前醫(yī)學領域的研究和應用。因此，找到成分更確定的、低成本的培養(yǎng)基用于hMSC的擴增而又不降低其可分化性和潛能是急需的。

生長培養(yǎng)基的選擇是擴增效力的關鍵步驟。動物血清被廣泛用作生長培養(yǎng)基中生長因子的來源[11,12]。然而，動物血清的組成是容易變化和不穩(wěn)定的，并且有必要在使用前對其適合性進行測試，這將極大地增加運營成本[11,12]。此外，不確定的血清成分還具有傳播傳染劑或者細菌、真菌或病毒污染的風險。鑒于含血清生長培養(yǎng)基的上述缺點[11,12]，需要在無血清條件下建立新型細胞培養(yǎng)基，以提高一致性，降低運營成本并避免感染。

在本領域中，對于能夠成本有效地擴增hMSC而又不降低其可分化性和潛能的無外源培養(yǎng)基和方法仍存在需求。

發(fā)明內容

在一個方面中，本公開提供了一種無異源培養(yǎng)基，其包含基礎培養(yǎng)基和至少50ng/mL的成纖維細胞生長因子，例如80-150ng/mL，例如約100ng/mL。

在一個實施方案中，成纖維細胞生長因子是堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)，尤其是人FGF2。

在一個實施方案中，本公開的無異源培養(yǎng)基可進一步包含人血小板裂解物和/或人血清。在一個實施方案中，所述人血小板裂解物和/或人血清的含量為0.5-5％v/v，例如0.5-1％v/v。

在一個實施方案中，所述基礎培養(yǎng)基可選自MEM培養(yǎng)基、α-MEM培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、IMDM培養(yǎng)基、HAM F12培養(yǎng)基、DMEM/F12混合培養(yǎng)基、PRMI1640培養(yǎng)基、StemSpan^TM培養(yǎng)基及其任何組合。

在一個實施方案中，本公開的無異源培養(yǎng)基可進一步包含細胞生長所需的營養(yǎng)物，例如氨基酸、維生素、碳水化合物和/或無機離子。

在一個實施方案中，本公開的無異源培養(yǎng)基不含有額外的細胞生長因子或激素。

在另一個方面中，本公開提供了一種培養(yǎng)基補充制劑，其包含成纖維細胞生長因子，其中所述成纖維細胞生長因子的含量使得在添加至基礎培養(yǎng)基后以至少50ng/mL的濃度存在，例如80-150ng/mL，如約100ng/mL。

在一個實施方案中，所述成纖維細胞生長因子是堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)，尤其是人FGF2。