[發明專利]無異源培養基及使用其擴增間充質干細胞的方法

在審

• 申請號: 202010408974.9
• 申請日: 2020-05-14
• 公開（公告）號: CN113667635A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 鄺緯陽;鐘樹根
• 申請（專利權）人: 夢芊科技知識產權有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 王冬;韓威威

1.一種無異源培養基，其包含基礎培養基和至少50ng/mL的成纖維細胞生長因子。

2.根據權利要求1所述的無異源培養基，其中所述成纖維細胞生長因子的濃度為80-150ng/mL，例如約100ng/mL。

3.根據權利要求1或2所述的無異源培養基，其中所述成纖維細胞生長因子是堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)，尤其是人FGF2。

4.根據權利要求1-3任一項所述的無異源培養基，其進一步包含人血小板裂解物和/或人血清。

5.根據權利要求4所述的無異源培養基，其中所述人血小板裂解物和/或人血清的含量為0.5-5％v/v，例如0.5-1％v/v。

6.根據權利要求1-5任一項所述的無異源培養基，其中所述基礎培養基選自MEM培養基、α-MEM培養基、DMEM培養基、IMDM培養基、HAM F12培養基、DMEM/F12混合培養基、PRMI1640培養基、StemSpan^TM培養基及其任何組合。

7.根據權利要求1-6任一項所述的無異源培養基，其進一步包含細胞生長所需的營養物，例如氨基酸、維生素、碳水化合物和/或無機離子。

8.根據權利要求1-7任一項所述的無異源培養基，其中所述無異源培養基不含有額外的細胞生長因子或激素。

9.一種培養基補充制劑，其包含成纖維細胞生長因子，其中所述成纖維細胞生長因子的含量使得在添加至基礎培養基后以至少50ng/mL的濃度存在，例如80-150ng/mL，如約100ng/mL；優選地，所述成纖維細胞生長因子是堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)，尤其是人FGF2；優選地，所述培養基補充制劑進一步包含人血小板裂解物和/或人血清，優選所述人血小板裂解物和/或人血清的含量使得在添加至基礎培養基后以0.5-5％v/v，例如0.5-1％v/v的濃度存在。

10.根據權利要求9所述的培養基補充制劑，其進一步包含細胞生長所需的營養物，例如氨基酸、維生素、碳水化合物和/或無機離子。

11.根據權利要求9或10所述的培養基補充制劑，其不含有額外的細胞生長因子或激素。

12.一種擴增人間充質干細胞的方法，其包括在不添加動物血清的情況下，在適合所述間充質干細胞生長的條件下(1)在根據權利要求1-8任一項所述的無異源培養基中培養所述間充質干細胞，或者(2)在添加了權利要求9-11任一項所述的培養基補充制劑的基礎培養基中培養所述間充質干細胞，以擴增所述間充質干細胞。

13.根據權利要求12所述的方法，其中在96小時內獲得約0.8x 10⁵個細胞/mL的間充質干細胞并且所述間充質干細胞維持約99％的細胞活性和間充質干細胞身份。

14.根據權利要求12或13所述的方法，其中在傳代至少50代后，所述間充質干細胞基本未分化并且增殖效率保持基本不變。