[發明專利]一種新型冠狀病毒抗體快速靈敏精準定量檢測方法及定量檢測儀

在審

• 申請號: 202010399453.1
• 申請日: 2020-05-12
• 公開（公告）號: CN111679070A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 隋志偉;戴新華;彭珂;彭濤;謝潔;方向;歐陽艷艷
• 申請（專利權）人: 中國計量科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 汪泉

本發明公開了一種快速定量檢測新型冠狀病毒抗體的檢測方法，為臨床體外檢測試劑技術領域，采用本發明的方法能夠對新型冠狀病毒抗體的檢測限低至1μg/mL，結合本發明提供的定量檢測儀可以對低至2μg/mL的新型冠狀病毒抗體進行快速定量檢測，可作為確診病例和無癥狀感染者快速排查的重要補充方法。本發明還提供了適用于本發明檢測方法的膠體金試紙條、試劑盒和抗體快速定量檢測儀，具有準確定量、靈敏度高、檢測時間短等優點，滿足了醫療機構大規模大批量人群血清學現場調查、疫苗免疫效果評價和康復患者抗體效價變化監測的迫切需要。

技術領域

本發明屬于臨床體外檢測試劑技術領域，涉及一種新型冠狀病毒抗體快速 靈敏精準定量檢測方法及使用的膠體金試紙條/試劑盒和抗體快速定量檢測儀。

背景技術

新型冠狀病毒(2019-nCoV)屬于β屬的新型冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形 或橢圓形，常為多形性，直徑60-140nm，是目前已知的可以感染人的第7種冠狀 病毒，其余6種冠狀病毒分別是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV- HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。其中前4種在人群中較為常見，致病性較低， 一般僅引起類似普通感冒的輕微呼吸道癥狀；另外2種是SARS冠狀病毒和MERS 冠狀病毒(中東呼吸綜合癥冠狀病毒)。基于免疫方法的抗體檢測可作為確診的 重要補充，并在患者康復和疫苗的抗體效價測定中起到決定性作用。

針對新冠病毒開展血清學抗體檢測具有重要的意義，其應用場景包括(但不 限于)：1)對于疫苗接種者體內抗體產生的情況進行定量檢測，評價疫苗接種 效果；2)對新冠感染者進行動態地血清學定量檢測，預判患者病情的發展，并 作為患者出院檢測的補充指標；3)評估康復者血清中和性抗體的效價，作為康 復者血清治療方案中的重要質量控制步驟；4)對病毒持續陽性及復陽患者進行 血清學定量檢測，分析病毒持續存在的潛在原因；5)用于海關對于出入境人員 的快速篩查，快速甄別攜帶傳染性新冠病毒的出入境人員；6)對人群進行大范 圍的血清學本底調查，評估人群潛在感染及免疫情況，甄別無癥狀感染者；7) 對于捐獻的血漿進行安全性評估，排除攜帶新冠病毒的可能性。目前開展的大部 分新冠病毒抗體檢測都只是定性檢測，大量的待測樣本、步驟繁多的手工操作， 檢測人員不足，甚至檢測結果需要人工判讀，這不僅導致無法及時獲得檢測結 果，而且往往會因檢測結果不準確而出現誤診。

因此，針對新型冠狀新冠病毒抗體的檢測，特別是N蛋白IgG抗體和S蛋白IgG 抗體檢測，有必要開發快速、靈敏、便捷、精準的檢測方法和專門的定量檢測儀 器，以滿足臨床檢驗需要。

發明內容

為改善上述技術問題，本發明提供了一種新型冠狀病毒抗體的定量檢測方 法，包括以下步驟：利用膠體金試紙條檢測血清樣品，加入稀釋液稀釋并孵育后， 用抗體快速定量檢測儀進行檢測。

根據本發明的實施方案，所述抗體快速定量檢測儀中嵌入了新型冠狀病毒 抗體濃度的標準曲線；

根據本發明的實施方案，所述標準曲線的繪制方法包括：用陰性混合人血清 稀釋的新型冠狀病毒抗體制備成系列濃度標準物質，其濃度范圍為1～310 μg/mL，分別吸取10μL標準物質加入膠體金試紙條加樣孔，再加入80μL稀釋液 稀于加樣孔，置于25～40℃下孵育3～30min，將膠體金試試紙條放入抗體快速定 量檢測儀中，儀器自動讀取光信號衰減強度值，然后以抗體濃度自然對數值為橫 坐標，光信號衰減強度值為縱坐標建立一條定量標準曲線；

根據本發明的實施方案，所述新型冠狀病毒抗體可以為N蛋白IgG抗體和/或 S蛋白IgG抗體；

根據本發明的實施方案，所述稀釋液為包含酪蛋白、蔗糖、PEG20000、海 藻糖、吐溫的磷酸鹽緩沖溶液；

根據本發明的實施方案，所述磷酸鹽緩沖溶液中溶質的濃度和為0.005-0.1 mol/L，例如為0.01mol/L；