[發明專利]一種新型冠狀病毒抗體快速靈敏精準定量檢測方法及定量檢測儀

在審

• 申請號: 202010399453.1
• 申請日: 2020-05-12
• 公開（公告）號: CN111679070A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 隋志偉;戴新華;彭珂;彭濤;謝潔;方向;歐陽艷艷
• 申請（專利權）人: 中國計量科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 汪泉

1.一種新型冠狀病毒抗體的定量檢測方法，包括以下步驟：利用膠體金試紙條檢測血清樣品，加入稀釋液稀釋并孵育后，用抗體快速定量檢測儀進行檢測；

優選地，所述抗體快速定量檢測儀中嵌入了新型冠狀病毒抗體濃度的標準曲線；

優選地，所述新型冠狀病毒抗體可以為N蛋白IgG抗體和/或S蛋白IgG抗體；

優選地，所述定量檢測方法的檢測限為1μg/mL，定量檢測限為2μg/mL；

優選地，所述稀釋液為包含酪蛋白、蔗糖、PEG20000、海藻糖、吐溫的磷酸鹽緩沖溶液。

2.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，所述標準曲線的繪制方法包括：用陰性混合人血清稀釋的新型冠狀病毒抗體制備成系列濃度標準物質，其濃度范圍為1～310μg/mL，分別吸取10μL標準物質加入膠體金試紙條加樣孔，再加入80μL稀釋液稀于加樣孔，置于25～40℃下孵育3～30min，將膠體金試試紙條放入抗體快速定量檢測儀中，儀器自動讀取光信號衰減強度值，然后以抗體濃度自然對數值為橫坐標，光信號衰減強度值為縱坐標建立一條定量標準曲線；

優選地，所述磷酸鹽緩沖溶液中溶質的濃度和為0.005-0.1mol/L；

優選地，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH為7.1-7.9，例如為7.2-7.6；

優選地，所述血清樣品的體積為2-30μL，例如為5-15μL；

優選地，所述稀釋液與血清樣品的體積比為2-20:1，例如為5-15:1；

優選地，所述孵育的溫度為15～50℃，例如為25～40℃；

優選地，所述孵育的時間為3～30min，例如為10～20min；

優選地，所述抗體快速定量檢測儀，還包括以下模塊：恒溫孵育模塊、490-500nm光源模塊、圖像掃描分析模塊和數據分析模塊；

優選地，所述抗體快速定量檢測儀，包括：進樣單元、檢測單元、數據分析單元、屏幕顯示單元和控制單元；所述進樣單元包括進樣孔、膠體金檢測卡；所述檢測單元包括恒溫孵育模塊、490-500nm光源模塊和圖像掃描分析模塊。

3.根據權利要求1或2所述定量檢測方法，其特征在于，所述定量檢測方法，包括以下步驟：將10μL人血清加入膠體金試紙條的加樣孔，再加入80μL稀釋液稀釋，置于25～40℃下孵育3～30min，將膠體金試紙條放入抗體快速定量檢測儀中，儀器自動讀取光信號衰減強度值，再通過標準曲線的線性擬合公式，得出被測血清樣品中新型冠狀病毒抗體濃度；

優選地，當所述新型冠狀病毒抗體為N蛋白IgG抗體時，在2-310μg/mL之間抗體濃度自然對數值與光信號衰減強度值有良好的線性關系(線性相關系數R²＝0.9933)，檢測限為1μg/mL，定量限為2μg/mL，其公式為：y＝13.222ln(x)–11.188，y表示光信號衰減強度值，x表示N蛋白IgG抗體濃度(μg/mL)；

優選地，當所述新型冠狀病毒抗體為S蛋白IgG抗體時，在2-310μg/mL之間抗體濃度自然對數值與光信號衰減強度值有良好的線性關系(線性相關系數R²＝0.9911)，檢測限為1μg/mL，定量限為2μg/mL，其公式為：y＝9.2724ln(x)–8.681，y表示光信號衰減強度值，x表示S蛋白IgG抗體濃度(μg/mL)。