[發(fā)明專利]融合DNA聚合酶突變體及其在等溫?cái)U(kuò)增中的應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010394538.0 | 申請日： | 2020-05-11 |
| 公開（公告）號： | CN113637085A | 公開（公告）日： | 2021-11-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬陳翠;姚永豪;崔崧;于繼彬 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州先達(dá)基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N9/12;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103 | 代理人： | 孫周強(qiáng) |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市吳中經(jīng)濟(jì)開*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 融合 dna 聚合 突變體 及其 等溫 擴(kuò)增 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種融合DNA聚合酶突變體，其特征在于，所述融合DNA聚合酶突變體包括融合Sso7d結(jié)構(gòu)域與基于野生型DNA聚合酶基礎(chǔ)上改造的突變體或衍生物；
所述野生型DNA聚合酶為來自
所述野生型DNA聚合酶經(jīng)過定點(diǎn)氨基酸突變得到所述基于野生型DNA聚合酶基礎(chǔ)上改造的突變體或衍生物；
所述野生型DNA聚合酶中，定點(diǎn)氨基酸突變的位點(diǎn)和氨基酸為Arg596、Asp598、Gly600、Ile716、Asp718、Try719中的兩種或多種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體，其特征在于，所述定點(diǎn)氨基酸突變采用以下（1）～（6）種取代方式中的至少兩個(gè)氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行取代：
（1）596位R被取代為K、G或者E；
（2）598位D被取代為V或者E；
（3）600位G被取代為K、R或者E；
（4）716位I被取代為V、F或者L；
（5）718位D被取代為K、A、T或者E；
（6）719位Y被取代為F。
3.權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體在等溫?cái)U(kuò)增中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述等溫?cái)U(kuò)增為基于鏈置換反應(yīng)的核酸等溫?cái)U(kuò)增。
5.一種核酸等溫?cái)U(kuò)增體系，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體與常規(guī)擴(kuò)增試劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述核酸等溫?cái)U(kuò)增體系，其特征在于，常規(guī)擴(kuò)增試劑包括引物組、探針、二價(jià)陽離子、Tris緩沖液。
7.一種核酸等溫?cái)U(kuò)增用試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體與常規(guī)組分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述核酸等溫?cái)U(kuò)增用試劑盒，用于樣本中是否包括特定生物樣本，如DNA或RNA等。
9.編碼權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體的氨基酸序列。
10.一種核酸等溫?cái)U(kuò)增的方法，其特征在于，以核酸為模板，在權(quán)利要求1所述融合DNA聚合酶突變體的存在下，在常規(guī)擴(kuò)增試劑中，完成核酸等溫?cái)U(kuò)增。
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