[發(fā)明專利]一種核酸提取試紙條及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010386962.0
• 申請日: 2020-05-09
• 公開（公告）號: CN111549024B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈曉霞;王琦;邱天;沈宇峰;孫健
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省中藥研究所有限公司;浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6844;C12Q1/686
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 李正

本發(fā)明提供了一種核酸提取試紙條及其使用方法，屬于分子生物學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域；所述核酸提取試紙條包括手持區(qū)和核酸結(jié)合區(qū)；所述核酸提取試紙條以帶有不干膠薄膜的PVC底板為主體；PVC底板的一端粘附有纖維素濾紙，為核酸結(jié)合區(qū)；PVC底板上未粘附纖維素濾紙的區(qū)域為手持區(qū)(疏水端)。本發(fā)明的核酸提取試紙條結(jié)構(gòu)簡單，使用過程中不需要復(fù)雜儀器。利用本發(fā)明的核酸提取試紙條能在25～50s內(nèi)對生物樣本中的核酸進(jìn)行快速提取純化，并基于該核酸提取試紙條，運(yùn)用PCR、LAMP擴(kuò)增技術(shù)對生物樣品進(jìn)行快速的分子檢測技術(shù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種核酸提取試紙條及?其使用方法。

背景技術(shù)

生物樣本的分子檢測，一般先提取生物樣本中的基因組，然后根據(jù)所需?檢測的目的基因設(shè)計上下游引物并利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。PCR檢測?首先需要提取樣本中的DNA。目前實驗室常用的DNA提取方法包括TPS?提取法、CTAB提取法以及SDS提取法等。以上DNA提取方法需要用到水?浴鍋、離心機(jī)、移液器等實驗設(shè)備以及氯仿、異丙醇、乙醇等有機(jī)試劑。提?取過程操作繁瑣，難度系數(shù)較高，耗時較長；同時，有機(jī)試劑會對操作者的?身體健康造成危害。目前需要一種操作簡便、提取時間短的核酸提取方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種核酸提取試紙條及其使用方法，利用本發(fā)明?的核酸提取試紙條，提取時間短且操作簡便。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種核酸提取試紙條，包括手持區(qū)和核酸結(jié)合區(qū)；所述核?酸提取試紙條以帶有不干膠薄膜的PVC底板為主體；PVC底板的一端粘附?有纖維素濾紙，為核酸結(jié)合區(qū)；PVC底板上未粘附纖維素濾紙的區(qū)域為手持?區(qū)。

優(yōu)選的，所述PVC底板的長×寬為：42～46mm×2mm；所述纖維素濾紙?的長×寬為：3.8～4.2mm×2mm。

本發(fā)明提供了上述方案所述核酸提取試紙條的使用方法，包括以下步?驟：

1)將生物樣品加入到核酸提取液中，得到混合液，對所述混合液研磨?8～15s，得到核酸粗提液；

2)將上述方案所述核酸提取試紙條的核酸結(jié)合區(qū)浸入到步驟1)所述核?酸粗提液中8～15s，得到第一試紙條；

3)將步驟2)所述第一試紙條浸入到洗脫液中3～8s，得到第二試紙條；

4)將步驟3)所述第二試紙條浸入到擴(kuò)增體系中3～8s，釋放提取到的?核酸，得到完整擴(kuò)增體系，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；所述擴(kuò)增體系中缺少擴(kuò)增模板。

優(yōu)選的，步驟1)中所述核酸提取液包括以下摩爾濃度的組分：Tris?90～110mM、KCl0.8～1.2M和EDTA8～12mM；所述核酸提取液的pH值為?7.8～8.2。

優(yōu)選的，步驟1)中所述生物樣品的質(zhì)量和核酸提取液的體積的比例為?20mg：300μL。

優(yōu)選的，步驟3)中所述洗脫液包括以下濃度的組分：Tris9～11mM和?體積百分含量為0.05％～0.15％的Tween-20。

優(yōu)選的，步驟4)中所述擴(kuò)增體系包括PCR擴(kuò)增體系或LAMP擴(kuò)增體?系。

優(yōu)選的，缺少擴(kuò)增模板的LAMP擴(kuò)增體系以24μL計，包括以下組分：?2×HNB?LAMPMix?12.5μL，10×LAMP?Primer?Mix?2.5μL，5M?Betain?3μL，?Bst2.0DNA?Polymerase?1μL和ddH₂O?4μL；擴(kuò)增程序為：65℃，1h。