[發(fā)明專利]一種核酸提取試紙條及其使用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010386962.0 | 申請日： | 2020-05-09 |
| 公開（公告）號： | CN111549024B | 公開（公告）日： | 2023-06-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 沈曉霞;王琦;邱天;沈宇峰;孫健 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江省中藥研究所有限公司;浙江大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6844;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385 | 代理人： | 李正 |
| 地址： | 310023 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 核酸 提取 試紙 及其 使用方法 | ||
1.一種核酸提取試紙條的使用方法，包括以下步驟：
1)將生物樣品加入到核酸提取液中，得到混合液，對所述混合液研磨8~15s，得到核酸粗提液；所述生物樣品為植物樣品；所述研磨采用的設(shè)備為高通量組織研磨機(jī)；
2)將核酸提取試紙條的核酸結(jié)合區(qū)浸入到步驟1)所述核酸粗提液中8~15s，得到第一試紙條；
3)將步驟2)所述第一試紙條浸入到洗脫液中3~8s，得到第二試紙條；
4)將步驟3)所述第二試紙條浸入到擴(kuò)增體系中3~8s，釋放提取到的核酸，得到完整擴(kuò)增體系，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；所述擴(kuò)增體系中缺少擴(kuò)增模板；
步驟1)中所述核酸提取液由以下摩爾濃度的組分組成：Tris?90~110mM、KCl?0.8~1.2M和EDTA8~12mM；所述核酸提取液的pH值為7.8~8.2；
步驟3)中所述洗脫液包括以下濃度的組分：Tris?9~11mM和體積百分含量為0.05％~0.15％的Tween-20；
所述核酸提取試紙條，包括手持區(qū)和核酸結(jié)合區(qū)；所述核酸提取試紙條以帶有不干膠薄膜的PVC底板為主體；PVC底板的一端粘附有纖維素濾紙，為核酸結(jié)合區(qū)；PVC底板上未粘附纖維素濾紙的區(qū)域為手持區(qū)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用方法，其特征在于，所述PVC底板的長×寬為：42~46mm×2mm；所述纖維素濾紙的長×寬為：3.8~4.2mm×2mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用方法，其特征在于，步驟1)中所述生物樣品的質(zhì)量和核酸提取液的體積的比例為20mg：300μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用方法，其特征在于，步驟4)中所述擴(kuò)增體系為LAMP擴(kuò)增體系。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的使用方法，其特征在于，所述LAMP擴(kuò)增體系以24μL計，包括以下組分：2×HNB?LAMP?Mix?12?.5μL，10×LAMP?Primer?Mix?2.5μL，5M?Betain?3μL，Bst2.0DNAPolymerase?1μL和ddH2O?4μL；擴(kuò)增程序為：65℃，1h。
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