[發明專利]一種血樣中五種抗腫瘤藥物的富集檢測方法及應用

有效

• 申請號: 202010375161.4
• 申請日: 2020-05-05
• 公開（公告）號: CN111562322B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 曹云峰;劉明莉;王璐;張繼民;王爽;曹冉
• 申請（專利權）人: 大連潤生康泰醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理事務所(普通合伙) 11756
• 代理人: 祝妍

1.一種血樣中五種抗腫瘤藥物的富集檢測方法，所述方法采用固相萃取技術富集，聯合高效液相色譜串聯質譜進行檢測，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）五種藥物的富集：

取待測血樣，首先加入堿溶液將pH值調整至9~12，然后加入內標溶液，混勻放置15分鐘后，過固相萃取裝置，分別加入水和混合液進行淋洗，最后用含甲酸有機試劑進行洗脫，得洗脫液；

（2）五種藥物的檢測：

將步驟（1）中得到的洗脫液采用高效液相色譜串聯質譜進行分析，計算藥物和內標峰面積比值，通過內標法建立標準曲線計算血樣中藥物濃度；

所述五種抗腫瘤藥物為甲氨蝶呤、紫杉醇、多西他賽、伊馬替尼、吉非替尼；

步驟（1）中，所述血樣為血清、血漿或全血，體積為50~200μL；所述堿溶液選自KOH溶液或NaOH溶液，質量分數為1%~10%；所述固相萃取裝置的填料為C18SAX；固相萃取方式選自固相萃取柱或固相萃取96孔樣品板；選用固相萃取規格為50~200mg/mL，其中mg為填料重量，mL為萃取柱體積或96孔樣品板的單孔體積；所述混合液為40%~60%有機試劑水溶液；所述有機試劑選自甲醇、乙醇或乙腈，所述甲酸的體積分數為0.5%~2%；

步驟（2）中，其中高效液相色譜條件：

色譜柱：Phenomenex Kinetex C18 2.6μm，5*50mm；柱溫40℃；進樣器溫度10℃；流動相A為含0.1%甲酸的水，B為甲醇，梯度洗脫為：0-0.2min，流動相B為22%；0.2-1.2min，流動相B由22%升高到95%；1.2-2.5min，流動相B為 95%；2.6-3.5min，流動相B為 22%；流速為0.4mL/min，進樣量1μL；

其中質譜參數為：

離子化模式：ESI+；噴霧電壓：4500V；溫度：450℃；霧化器GS1：40psi；輔助霧化氣GS2：40psi；氣簾氣：30psi；掃描方式：多反應檢測MRM；

。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述標準曲線的各個藥物濃度范圍為：紫杉醇5-1000ng/mL，多西他賽5-1000ng/mL，伊馬替尼50-10000ng/mL，吉非替尼20-4000ng/mL，甲氨蝶呤0.1-20μmol/L。