[發明專利]RT-RAA熒光法檢測SARS-CoV-2的引物、探針、試劑盒和檢測方法

有效

• 申請號: 202010374163.1
• 申請日: 2020-05-06
• 公開（公告）號: CN111518951B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 袁靜;薛冠華;李少麗;崔晶花;閆超;趙漢青;馮燕玲
• 申請（專利權）人: 首都兒科研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;周達

本發明提供了一種RT?RAA熒光法檢測SARS?CoV?2的引物、探針、試劑盒和檢測方法。本發明的RT?RAA熒光法檢測SARS?CoV?2的引物包括如SEQ ID NO.2所示序列的引物和如SEQ ID NO.3所示序列的引物，探針包括如SEQ ID NO.4所示序列的探針或在SEQ ID NO.4所示序列基礎上經修飾的探針。本發明的檢測方法具有檢測時間短、靈敏度高、特異性強、操作簡單等特點，只需在37～42℃條件下反應5～15min便可分析結果；對于SARS?CoV?2快速檢出具有非常重要的意義，具有較大的應用前景。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，更具體的說是涉及RT-RAA熒光法檢測SARS-CoV-2的引物、探針、試劑盒和檢測方法。

背景技術

冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起普通流感以及中東呼吸綜合征(MERS)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴重疾病。2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是一種新型的RNA冠狀病毒，可以導致新型冠狀病毒肺炎疾病(COVID-19)。

2019新型冠狀病毒傳染性較強。世界衛生組織于2020年1月30日宣布，將新型冠狀病毒疫情列為國際突發公共衛生事件。

人感染了冠狀病毒后常見體征有呼吸道癥狀、發熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等。在較嚴重病例中，感染可導致肺炎、嚴重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。目前對于新型冠狀病毒所致疾病沒有特異治療方法，需根據患者臨床情況進行對癥治療。

目前對SARS-CoV-2的病原學檢測方法主要為病毒核酸檢測。對于發病例數不斷增加，基層醫院實驗室檢測條件有限等問題，開發一種簡單、快速和特異性高的診斷方法是非常有必要的，可以盡快檢出患者，為下一步治療及預防疾病的傳播有非常重要的意義。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的引物。

本發明的另一目的在于提供一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的探針。

本發明的另一個目的在于提供一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的試劑盒。

本發明的另一個目的在于提供所述引物、探針或試劑盒用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的相關應用。

一方面，本發明提供了一種RT-RAA熒光法檢測SARS-CoV-2的引物，其包括如SEQID NO.2所示序列的引物和如SEQ ID NO.3所示序列的引物：

5’-CTTCAACCTAGGACTTTTCTATTAAAATATAATG-3’(SEQ ID NO.2)；

5’-GTTGGTTGGACTCTAAAGTTAGAAGTTTGATAG-3’(SEQ ID NO.3)。

另一方面，本發明還提供了一種RT-RAA熒光法檢測SARS-CoV-2的探針，其包括如SEQ ID NO.4所示序列的探針，或在SEQ ID NO.4所示序列基礎上經修飾的探針：

5’-CCATTACAGATGCTGTAGACTGTGCACTTGACCCTCTCTCAGAAACAAAGTGTACG-3’(SEQ IDNO.4)。

根據本發明的具體實施方案，本發明的RT-RAA熒光法檢測SARS-CoV-2的探針，其中，所述修飾包括熒光報告基團和熒光淬滅基團修飾。具體地，所述修飾包括：

探針序列離5’端堿基數35bp的位置上的堿基T采用熒光報告基團FAM修飾，探針序列離5’端堿基數39bp的位置上的堿基T用熒光淬滅基團BHQ修飾，探針序列離5’端堿基數37bp的位置上的堿基T用四氫呋喃殘基(THF)替換。