[發明專利]免疫細胞體外培養、誘導、激活、凍存方法及其細胞庫建立

有效

• 申請號: 202010371435.2
• 申請日: 2020-05-06
• 公開（公告）號: CN111454903B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 張炳強;陳夢夢
• 申請（專利權）人: 青島瑞思德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C40B50/06;A01N1/02
• 代理公司: 上海怡恩專利代理事務所(普通合伙) 31336
• 代理人: 牟俊玲

1.一種免疫細胞體外培養、誘導、激活、凍存方法及其細胞庫建立，其特征在于，包括：利用免疫細胞專用擴增培養基將單個核細胞進行第一階段擴增培養，得到初步擴增的免疫細胞；利用免疫細胞專用誘導培養基將初步擴增的免疫細胞進行第二階段誘導和擴增培養，得到誘導的免疫細胞；利用免疫細胞專用激活培養基將誘導的免疫細胞進行第三階段激活和擴增培養，獲得大量的激活功能的免疫細胞；利用免疫細胞專用凍存液凍存免疫細胞，得到凍存的免疫細胞；按ABO/RH分型和HLA分型進行保存，建立可供檢索的免疫細胞信息檔案，建免疫細胞庫。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞專用擴增培養基是添加了500-2000IU/ml IL-2、500-2000IU/ml IL-10、0.5-1ng/ml IL-1α和1-4ng/ml LIF、0.5-2.5ng/ml EPO、1-4ng/ml KGF、2-5ng/ml睪酮、1-4μg/ml甲狀旁腺激素、1-4μg/ml層粘連蛋白的無血清淋巴細胞培養基。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞專用誘導培養基是添加了500-2000IU/ml IL-2、500-2000IU/ml IL-10、1-4ng/ml bFGF、1-4ng/ml BMP-4、0.2-0.8μg/ml雷帕霉素、0.2-0.8μg/ml淫羊藿苷、20-80ng/ml曲美替尼、1-4ng/ml氫化可的松、1-4μg/ml層粘連蛋白的無血清淋巴細胞培養基。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞專用激活培養基是添加了500-2000IU/ml IL-2、500-2000IU/ml IL-10、1-4ng/ml TGF-β、1-2ng/ml Forskolin、20-80ng/ml白藜蘆醇、1-4μg/ml對乙酰氨基酚、1-4μg/ml層粘連蛋白的無血清淋巴細胞培養基。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞專用凍存液是包含5體積％的DMSO、1-2體積％的白蛋白、1-2體積％氨基乙醇、91-93體積％的無血清淋巴細胞培養基。

6.根據權利要求2、3、4、5所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞專用擴增培養基、免疫細胞專用誘導培養基、免疫細胞專用激活培養基和免疫細胞專用凍存液中，所述的無血清淋巴細胞培養基為X-VOVO15無血清培養基或市售其他類型無血清培養基。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞為自然殺傷細胞。