[發明專利]快速檢測SPLCV的引物、試劑盒、檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202010367637.X
• 申請日: 2020-04-30
• 公開（公告）號: CN111534638B
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發明（設計）人: 劉起麗;李成偉;周鋒;胡海燕;李東宵;宋普文;孫海麗;卜瑞方;于永昂;魏琦超;關園園;胡平;陳二永
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種快速檢測SPLCV的試劑盒，其特征在于，含有檢測溶液，所述檢測溶液包括快速檢測SPLCV的引物，上游引物P2F:5’-CCT GGA TTG CAG AGG AAG A-3’，SEQ ID NO.1；下游引物P2R:5’-AGC AATTGG GAC AGC ATT C-3’，SEQ ID NO.2；還包括dNTPs、Ex-Taq反應緩沖液和Ex-Taq酶；

快速檢測SPLCV的方法，包括以下步驟：

(1)提取植物樣品總DNA；

(2)以提取的植物樣品總DNA為模版，用上述的引物進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；

(3)凝膠電泳鑒定所述PCR產物，得到1500bp條帶時判斷植物樣品中存在SPLCV；

步驟(1)中所述植物樣品包括甘薯春、秋梢嫩葉、葉脈及附近組織或甘薯薯塊內部組織；

所述PCR擴增的反應體系如下：

2.5mM dNTPs 4μL、10×Ex-Taq反應緩沖液5μL、10μM上游引物1μL、10μM下游引物1μL、Ex-Taq酶1μL、DNA 1μL，ddH2O補足50μL；

所述PCR擴增的反應條件如下：94℃預變性3min，94℃變性50s，52℃退火50s，72℃延伸2min，共32個循環，最后72℃延伸10min。

2.權利要求1所述的試劑盒在檢測SPLCV病毒或/和植物樣本中是否含有SPLCV病毒中的應用。