[發明專利]一種基于熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的試劑盒

在審

• 申請號: 202010359815.4
• 申請日: 2020-04-30
• 公開（公告）號: CN111500777A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 金勇豐;張鵬;謝珍;邢寬;何志健
• 申請（專利權）人: 嘉興實踐醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于熒光RT?PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的試劑盒，包括微載體、引物對和探針；所述微載體具有與冠狀病毒一一對應的編碼信息，所述的引物對包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述探針序列如SEQ ID NO：3所示。本發明還公開了一種檢測新型冠狀病毒的方法。本發明的試劑盒靈敏度高，特異性強；本發明的檢測方法快速且準確率高。

技術領域

本發明涉及一種病毒的檢測，特別是涉及一種基于熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的試劑盒。

背景技術

新型冠狀病毒屬于冠狀病毒科、beta冠狀病毒屬，是2019年12月至2020年1月流行并被鑒定發現的一種新型冠狀病毒。新型冠狀病毒能致人疾病，能在人和動物之間傳播，新型冠狀病毒感染的癥狀有發熱、喘息和肺炎等。

由于新型冠狀病毒是2020年被鑒定發現的一種全新型冠狀病毒，目前沒有特異性的檢測方法，而且這種病毒導致人呼吸道重癥感染的情況比較常見，并有一定的傳染性，確診患者需要隔離治療，故急切需要開發一種能夠快速且準確對這種新型冠狀病毒進行鑒定的分子方法，從而達到有效控制疫情流行傳播，患者快速診斷隔離治療的目的。

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉錄 (RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用，從 RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。 RT—PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

為此，期待一種基于熒光RT—PCR檢測技術檢測新型冠狀病毒的試劑盒和方法，能夠有效解決現有技術中存在的缺陷。

發明內容

本發明的主要目的在于，克服現有的病毒檢測中存在的檢測速率慢且檢測準確率低的缺陷，而提供一種基于熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的試劑盒。本發明的試劑盒檢測速度快且準確度高，具有廣泛的應用前景。

本發明的目的及解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

本發明提供了一種基于熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的試劑盒，包括微載體、引物對和探針；所述微載體具有與冠狀病毒一一對應的編碼信息，所述的引物對包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述探針序列如SEQ ID NO：3所示。

在本發明的一些實施方案中，所述探針的核酸在5’端連接有熒光報告基團，在核酸的3’端連接有熒光淬滅基團，且兩個探針的熒光報告基團不同。

在本發明的一些實施方案中，所述熒光報告基團選自FAM、VIC、ROX、CY3和 CY5中的任一種。

在本發明的一些實施方案中，所述熒光淬滅基團選自TAMRA、BHQ1、BHQ2和 NFQ中的任一種。

在本發明的一些實施方案中，所述試劑盒還包含PCR緩沖液以及Taq酶。

在本發明的一些實施方案中，所述試劑盒還包括陽性對照和陰性對照。

在本發明的一些實施方案中，所述陽性對照液為含有新型冠狀病毒的擴增序列。

在本發明的一些實施方案中，所述陰性對照為RNase Free H₂O。

本發明的目的及解決其技術問題還可采用以下技術措施進一步實現。

本發明提供了一種新型冠狀病毒的RT-PCR檢測方法，該方法包括以下步驟：