[發明專利]一種畢赤酵母EHT1基因過表達及敲除菌株構建的實驗方法在審
| 申請號： | 202010347630.1 | 申請日： | 2020-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN111500618A | 公開（公告）日： | 2020-08-07 |
| 發明（設計）人： | 陳嘉;施俊鳳;馮志宏;杜婧婷;張新憲;田倩;趙琳;白宇皓;張立新;閆釗 | 申請（專利權）人： | 山西省農業科學院農產品貯藏保鮮研究所 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N1/19;C12N15/55;C12N9/16;C12Q1/44;C12Q1/686;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578 | 代理人： | 吳倩 |
| 地址： | 030031 山*** | 國省代碼： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酵母 eht1 基因 表達 菌株 構建 實驗 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種畢赤酵母EHT1基因過表達及敲除菌株構建的實驗方法，其特征在于：包括以下步驟：
S1、構建畢赤酵母的EHT1基因表達菌株；
S11、設計和合成EHT1引物；
S12、提取畢赤酵母菌體的質粒；
S13、線性化質粒及制備畢赤酵母感受態；
S14、電轉化EHT1/pPIC9k質粒；
S2、構建敲除EHT1基因的畢赤酵母菌株；
S21、EHT1基因的敲除和轉化；
S22、鑒定畢赤酵母EHT1基因是否敲除；
S23、設計及合成EHT1檢測引物；
S24、利用qRT-PCR檢測EHT1的mRNA；
S25、SPME GC-MS酶活性分析。
2.如權利要求1所述的一種畢赤酵母EHT1基因過表達及敲除菌株構建的實驗方法，其特征在于：還包括：
步驟S3、結果分析；
S31、克隆EHT1基因和構建質粒；
S32、鑒定EHT1基因敲除DNA的水平；
S33、檢測EHT1過表達及敲除mRNA水平；
S34、檢測EHT1過表達敲除蛋白水平；
S35、測定酯酶活性；
S36、SPME GC-MS分析。
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