[發明專利]一種甲型/乙型流感病毒、新型冠狀病毒檢測方法與試劑盒

在審

• 申請號: 202010345278.8
• 申請日: 2020-04-27
• 公開（公告）號: CN113637795A
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 郭圣明;江永忠;夏懿
• 申請（專利權）人: 上海星耀醫學科技發展有限公司;湖北省疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種甲型/乙型流感病毒、新型冠狀病毒檢測方法與試劑盒，其特征在于，分別采用甲型流感病毒特異性引物SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和探針SEQ ID No.3，乙型流感病毒特異性引物SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和探針SEQ ID No.6，新型冠狀病毒ORF1ab基因特異性引物SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和探針SEQ ID No.9，新型冠狀病毒N基因特異性引物SEQID No.10、SEQ ID No.11和探針SEQ ID No.12，要求TaqMan探針SEQ ID No.3和SEQ IDNo.6 5’端標記FAM基團、探針3’端標記熒光淬滅基團，要求TaqMan探針SEQ ID No.9 5’端標記JOE基團、探針3’端標記熒光淬滅基團，要求TaqMan探針SEQ ID No.12 5’端標記ROX基團、探針3’端標記熒光淬滅基團，通過多通道熒光PCR擴增技術在單管反應中實現甲型/乙型流感病毒、新型冠狀病毒檢測。

2.如權利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，所用甲型/乙型流感病毒、新型冠狀病毒檢測靶序列為SEQ ID No.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15、SEQ ID No.16，設計的引物SEQ ID No.1/SEQ ID No.2、SEQ ID No.4/SEQ ID No.5、SEQ ID No.7/SEQ ID No.8、SEQID No.10/SEQ ID No.11分別能擴增SEQ ID No. 13~ SEQ ID No. 16靶序列連續130～180個核苷酸，根據序列優化設計后的引物能擴增其連續90-150個核苷酸。

3.如權利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，分別基于SEQ ID No.13～SEQIDNo.16靶序列設計的型特異性TaqMan探針SEQ ID No.3、SEQ ID No.6、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12，長度為22～35個核苷酸， 5’端均標記不同的熒光發光基團、3’端標記熒光淬滅基團。

4.如權利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，試劑盒所用的甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因引物序列可以為和SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10以及SEQ IDNo.11同源性大于85％以上的序列，TaqMan熒光探針可以為SEQ ID No.3、SEQ ID No.6、SEQID No.9和SEQ ID No.12同源性大于85％以上序列，探針5’端分別標記FAM、JOE/VIC、ROX/TEXAS RED熒光基團，3’端標記BHQ淬滅基團。

5.如權利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，引入了一個內源性內參照系統用于避免檢測結果假陰性，內參照系統包括內參引物SEQ ID No.17和SEQ ID No.18、內參探針SEQ ID No.19，其中探針SEQ ID No.19 5’端標記CY5熒光基團、3’端標記BHQ2淬滅基團，內參探針也可以是和SEQ ID No.19序列同源性大于85％以上的序列。

6.如權利要求1所述方法與試劑盒，其特征在于，試劑盒包括FluA/B/nCov反應液、RT-PCR酶、陰性對照、陽性對照。