[發(fā)明專(zhuān)利]一種PCR微衛(wèi)星引物及其用于大黃魚(yú)親子鑒定的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010344849.6
• 申請(qǐng)日: 2020-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111394478B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王俊;潘保柱;蔣小明;孫智薇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西安理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 西安弘理專(zhuān)利事務(wù)所 61214
• 代理人: 韓玙

本發(fā)明公開(kāi)了一種PCR微衛(wèi)星引物，包括引物位點(diǎn)1～10，引物位點(diǎn)的引物序列及退火溫度。本發(fā)明還公開(kāi)了一種PCR微衛(wèi)星引物用于大黃魚(yú)親子鑒定的方法，首先，選擇適宜的大黃魚(yú)待測(cè)樣品，提取大黃魚(yú)待測(cè)樣品的DNA；采用PCR微衛(wèi)星引物位點(diǎn)1～10對(duì)大黃魚(yú)待測(cè)樣品的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；在體積百分?jǐn)?shù)為12％的聚丙烯酰胺膠上對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離；最后統(tǒng)計(jì)PCR微衛(wèi)星引物位點(diǎn)1～10中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基因型；根據(jù)基因型進(jìn)行大黃魚(yú)待測(cè)樣品之間的親子鑒定。解決了現(xiàn)有的大黃魚(yú)近親交配、種群遺傳多樣性下降的問(wèn)題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及大黃魚(yú)親子鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種PCR微衛(wèi)星引物，本發(fā)明還涉及上述PCR微衛(wèi)星引物用于大黃魚(yú)親子鑒定的方法。

背景技術(shù)

大黃魚(yú)，體延長(zhǎng)，側(cè)扁，體長(zhǎng)約40～50cm，金黃色，尾柄細(xì)長(zhǎng)，鱗較小，背鰭起點(diǎn)至側(cè)線間具8～9行鱗，椎骨25～27枚。平時(shí)棲息較深海區(qū)，4-6月向近海洄游產(chǎn)卵，秋冬季又向深海區(qū)遷移。大黃魚(yú)的鰾能發(fā)聲，漁民常借此估測(cè)魚(yú)群的大小，是我國(guó)一種重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)。我國(guó)沿海大黃魚(yú)的產(chǎn)卵場(chǎng)約10個(gè)，有江蘇的呂泗洋，浙江的岱衢洋、大戢洋、貓頭洋、大目洋及洞頭洋，福建的官井洋、東引漁場(chǎng)，廣東的南澳漁場(chǎng)和硇洲島漁場(chǎng)。大黃魚(yú)一生能多次重復(fù)產(chǎn)卵，生殖期中一般排卵2～3次。懷卵量與個(gè)體大小成正比，由10～275萬(wàn)粒不等，一般為20～50萬(wàn)粒。卵浮性，球形，卵徑1.19～1.55毫米，卵膜光滑，有一無(wú)色油球，直徑為0.35～0.46毫米。受精卵在水溫18℃時(shí)約經(jīng)50小時(shí)孵出仔魚(yú)。各地方群的年齡組成不同，各群中個(gè)體的壽命、性成熟年齡也不相同。大黃魚(yú)最大個(gè)體全長(zhǎng)可達(dá)755毫米，重3.8千克。

近年來(lái)，由于過(guò)度捕撈、水利工程建設(shè)等人類(lèi)活動(dòng)，大黃魚(yú)的資源量急劇下降。從受威脅程度、遺傳多樣性、物種價(jià)值等方面進(jìn)行定量評(píng)估來(lái)看，大黃魚(yú)被列為低危魚(yú)類(lèi)。微衛(wèi)星標(biāo)記是目前研究瀕危動(dòng)物保護(hù)遺傳學(xué)中最理想的一類(lèi)方式。微衛(wèi)星具有多態(tài)性高、共顯性遺傳、遍布整個(gè)基因組等優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于動(dòng)物遺傳性研究。親子鑒定，是指運(yùn)用生物學(xué)、遺傳學(xué)以及有關(guān)學(xué)科的理論和技術(shù)，根據(jù)遺傳性狀在子代和親代之間的遺傳規(guī)律，判斷被控的父母和子女之間是否親生關(guān)系的鑒定。

在大黃魚(yú)遺傳育種的研究過(guò)程中，苗種的來(lái)源比較雜亂，僅采用物理和形態(tài)進(jìn)行個(gè)體比較很難區(qū)分不同的來(lái)源。傳統(tǒng)方法是在對(duì)大黃魚(yú)大規(guī)模的群體選育或家系選育時(shí)，會(huì)對(duì)大黃魚(yú)個(gè)體打標(biāo)進(jìn)行區(qū)別，但是標(biāo)容易脫落，造成大黃魚(yú)個(gè)體混亂，在實(shí)施的過(guò)程中有很大的限制。為了明確大黃魚(yú)在群體選育或家系選育時(shí)個(gè)體親本的具體信息，急需一種有效的大黃魚(yú)親子鑒定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種PCR微衛(wèi)星引物，解決了現(xiàn)有的大黃魚(yú)近親交配、種群遺傳多樣性下降的問(wèn)題。

本發(fā)明的另一目的是提供上述PCR微衛(wèi)星引物用于大黃魚(yú)親子鑒定的方法，解決了現(xiàn)有的大黃魚(yú)近親交配、種群遺傳多樣性下降的問(wèn)題。

本發(fā)明所采用的一種技術(shù)方案是一種PCR微衛(wèi)星引物，包括引物位點(diǎn)1～10，引物位點(diǎn)的引物序列及退火溫度如下所示：

本發(fā)明所采用的另一種技術(shù)方案是上述一種PCR微衛(wèi)星引物用于大黃魚(yú)親子鑒定的方法，具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1，選擇適宜的大黃魚(yú)待測(cè)樣品，提取大黃魚(yú)待測(cè)樣品的DNA；

步驟2，采用PCR微衛(wèi)星引物位點(diǎn)1～10對(duì)大黃魚(yú)待測(cè)樣品的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

步驟3，在體積百分?jǐn)?shù)為12％的聚丙烯酰胺膠上對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離；

步驟4，統(tǒng)計(jì)PCR微衛(wèi)星引物位點(diǎn)1～10中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基因型；根據(jù)基因型進(jìn)行大黃魚(yú)待測(cè)樣品之間的親子鑒定。

本發(fā)明的特點(diǎn)還在于：

PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系：