[發明專利]一種PCR微衛星引物及其用于大黃魚親子鑒定的方法有效
| 申請號： | 202010344849.6 | 申請日： | 2020-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN111394478B | 公開（公告）日： | 2022-06-17 |
| 發明（設計）人： | 王俊;潘保柱;蔣小明;孫智薇 | 申請（專利權）人： | 西安理工大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 西安弘理專利事務所 61214 | 代理人： | 韓玙 |
| 地址： | 710048 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 pcr 衛星 引物 及其 用于 大黃魚 親子鑒定 方法 | ||
1.一種PCR微衛星引物，其特征在于，包括引物位點1~10，所述引物位點的引物序列及退火溫度如下所示
。
2.如權利要求1所述的一種PCR微衛星引物用于大黃魚親子鑒定的方法，其特征在于，具體按照以下步驟實施：
步驟1，選擇適宜的大黃魚待測樣品，提取所述大黃魚待測樣品的DNA；
步驟2，采用所述PCR微衛星引物對大黃魚待測樣品的DNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；
步驟3，在體積百分數為12％的聚丙烯酰胺膠上對所述PCR擴增產物進行電泳分離；
步驟4，統計所述PCR擴增產物的基因型；根據所述基因型進行大黃魚待測樣品之間的親子鑒定。
3.根據權利要求2所述的一種PCR微衛星引物用于大黃魚親子鑒定的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系：
PCR反應體系總體積25μL，10×PCR Buffer 2.5μL，2.5mmol/L dNTP 0.5μL，MgCl2 1.5μL，所述PCR反應體系的上下游引物各1μL，Taq酶0.4μL，DNA模板3μL，超純水15.1μL。
4.根據權利要求3所述的一種PCR微衛星引物用于大黃魚親子鑒定的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：
95℃預變性3min；95℃變性30s，退火溫度56℃復性30s，72℃延伸30s，進行30個循環；最后72℃延伸10min；4℃保存。
5.根據權利要求2所述的一種PCR微衛星引物用于大黃魚親子鑒定的方法，其特征在于，步驟3中，所述聚丙烯酰胺膠為非變性聚丙烯酰胺膠。
6.根據權利要求2所述的一種PCR微衛星引物用于大黃魚親子鑒定的方法，其特征在于，步驟4中，采用BIO-PROFIL軟件進行基因型分型，采用CERVUS軟件計算累計排除概率。
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