[發明專利]雞球蟲多價重組蛋白疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010344564.2
• 申請日: 2020-04-27
• 公開（公告）號: CN111514284A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 劉群;楊旭;陳慶忠;宋星桔;劉晶;安同偉;許建海
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A61K39/012
• 分類號: A61K39/012;A61P33/02;C12N15/11;C12N15/66;C12N15/70;C07K16/20;C07K16/06
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 賈慧娜;王芊雨

本發明公開了一種雞球蟲多價重組蛋白疫苗及其制備方法和應用。所述雞球蟲多價重組蛋白疫苗包含4種雞球蟲蛋白：柔嫩艾美耳球蟲棒狀體蛋白41，柔嫩艾美耳球蟲配子體蛋白22，巨型艾美耳球蟲配子體蛋白56，和堆型艾美耳球蟲裂殖子蛋白Ea3?1E。將上述4種雞球蟲蛋白分別與大腸桿菌表達載體相連獲重組表達載體，表達重組蛋白。將不同種重組蛋白按比例與佐劑混合，免疫母雞后的后代雛雞接種球蟲后與未免疫母雞后代雛雞相比，能夠有效提高接種球蟲的雛雞存活率和相對增重，卵囊排出量減少，顯示了良好的母源免疫效果。

技術領域

本發明是關于生物獸藥技術領域，特別是關于一種雞球蟲多價重組蛋白疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

雞球蟲病(Coccidiosis)是由7種艾美耳球蟲感染引起的嚴重危害養雞業的疾病之一，呈世界性分布。引起雞球蟲病的病原包括柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)、巨型艾美耳球蟲(Eimeria maxima)、堆型艾美耳球蟲(Eimeria acervulina)、布氏艾美球蟲(Eimeria brunetti)、毒害艾美耳球蟲(Eimeria necatrix)、早熟艾美耳球蟲(Eimeriapraecox)和和緩艾美耳球蟲(Eimeria mitis)。不同種球蟲寄生于雞的不同腸段上皮細胞，引起以腸炎、出血、增重下降甚至死亡等一系列危害，危害程度與球蟲種類、感染量及雞只日齡等密切相關。生產中，雞球蟲病常為混合感染，發病率高達50-70％，死亡率為20-30％，嚴重時高達80％。每年世界范圍內約有400億只雞感染雞球蟲病，全球每年因雞球蟲病造成的經濟損失約數十億美元。目前，雞球蟲病的防控主要依靠抗球蟲藥物和活疫苗，但由于耐藥性和藥物殘留等問題，抗球蟲藥物的使用受到了限制；活疫苗的保存、運輸、應用以及管理等等問題也限制了其廣泛應用。另外，已經在有些國家注冊的球蟲疫苗是巨型艾美耳球蟲的配子體蛋白疫苗，通過提取的巨型艾美耳球蟲的天然蛋白制成，主要成分為配子體階段的EmGAM56、EmGAM82和EmGAM230蛋白，有較好的母源免疫保護效果。但是制作成本非常高，難以推廣應用。因此，研制防控雞球蟲病的新產品和新方法具有重要意義。

雞球蟲重組蛋白疫苗的研制關鍵在于保護性抗原的篩選。在球蟲的入侵、發育和繁殖過程中的多種分泌蛋白不僅在其生命活動中具有重要意義，而且可能是球蟲的重要免疫原。因此，篩選出具有較好免疫原性的抗原，進行有效組合，組成重組蛋白疫苗。重組蛋白疫苗與強毒苗、弱毒苗以及天然蛋白疫苗相比，具有安全性高、純度高、穩定性好、產量高等優點，具有較好的應用前景。

禽類的母源免疫(Maternal immunization)是指將抗原免疫母雞后，母雞產生特異性的抗體能通過卵黃抗體的形式傳遞給后代雛雞，并在一定時間內為雛雞提供保護。母源免疫在禽養殖業上已有應用母源免疫的優點在于免疫一只母雞就可使上百只雛雞獲得很好的保護作用，且免疫程序簡單方便和成本低。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雞球蟲多價重組蛋白疫苗，該雞球蟲多價重組蛋白疫苗是通過篩選雞球蟲的優質抗原組合成重組蛋白疫苗，其能夠誘導母雞較好的免疫反應，并且母源抗體能夠保護后代雛雞對抗雞球蟲的感染，可通過免疫母雞預防后代雛雞的球蟲病。

為實現上述目的，本發明提供了一種雞球蟲多價重組蛋白疫苗，該雞球蟲多價重組蛋白疫苗包含4種雞球蟲重組蛋白：柔嫩艾美耳球蟲棒狀體蛋白41(EtROP41)、柔嫩艾美耳球蟲配子體蛋白22(EtGAM22)、巨型艾美耳球蟲配子體蛋白56(EmGAM56)、和堆型艾美耳球蟲裂殖子蛋白Ea3-1E，所述4種雞球蟲重組蛋白均為原核表達，依次具有如SEQ ID NO.1-4所示的氨基酸序列，并按照1:1:1:1的質量比例混合。