[發明專利]Dkk-3蛋白功能性片段及其應用

有效

• 申請號: 202010335115.1
• 申請日: 2020-04-24
• 公開（公告）號: CN111484550B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 吳思;胡蘋
• 申請（專利權）人: 蘇州神肌贏生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07K19/00;C12N15/12;A61K38/17;A61K39/395;A61K47/64;A61K49/00;A61P21/00
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本公開提供了一種Dkk?3蛋白功能性片段及其應用。具體來說，本公開揭示了一種由氨基酸編碼的Dkk?3蛋白的不同片段在肌肉萎縮中的功能。其中，Dkk?3蛋白的N端片段具有誘導肌肉萎縮的完整功能，Dkk?3蛋白的L?CDR2?C片段具有拮抗N端片段誘導肌肉萎縮的功能。本公開還提供了以Dkk?3蛋白的特定位點為靶點治療肌肉萎縮的藥物，Dkk?3蛋白的L?CDR2?C片段本身或其融合蛋白可以作為拮抗Dkk?3誘導肌肉萎縮功能的靶向藥物。

技術領域

本公開涉及生物技術領域，具體涉及肌肉萎縮相關的蛋白質分子標記Dkk-3蛋白的功能性片段、前述功能性片段的篩選及其應用。

背景技術

Dkk蛋白家族(Dickkopf family protein)屬于分泌型的糖蛋白，包括五個家族成員，分別是Dkk-1、Dkk-2、Dkk-3、Dkk-4和DkkL1(Niehrs，2006)。

Dkk蛋白家族成員的蛋白結構包括N端的信號肽(Signal peptide)，兩個半胱氨酸富集區(Cysteine-rich domain，CRD)(DkkL1除外)以及連接兩個半胱氨酸富集區的連接肽段(Linker)(見圖2)。每一個CRD區域都存在十個保守的半胱氨酸位點?？拷麼端的CRD1為Dkk蛋白家族所特有(Krupnik et al.，1999)。另一個靠近C端(碳端)的半胱氨酸富集區CRD2在蛋白質序列上與共脂肪酶折疊區(Colipase fold)的功能域相似(Aravind andKoonin，1998)。

與功能研究相似，在Dkk蛋白家族中，結構研究較多家族成員是Dkk-1和Dkk-2。將Dkk-1和Dkk-2從連接肽段處分為N段和C段，二者的C段均能夠與LRP6受體結合。Dkk-1的N段能夠抑制Dkk-1的C段與LRP6的結合，Dkk-2的N段則沒有類似功能(Brott and Sokol，2002)。這可能解釋了Dkk-1和Dkk-2在爪蟾發育中的不同功能(Brott and Sokol，2002)。這些結果提示，Dkk蛋白家族中，不同成員的N段結構域的功能可能不相同，甚至存在很大差異，部分結構域與全長蛋白的功能有可能完全相反。

與Dkk-1及Dkk-2相比，目前針對Dkk-3結構域功能的研究還比較少。2008年，Abarzua等人研究發現Dkk-3 N端78個氨基酸組成的結構域是Dkk-3誘導人前列腺癌細胞發生內質網應激反應和細胞凋亡的最主要區域(Abarzua et al.，2008)。2015年，Kinoshita等人發現，Dkk-3誘導單核細胞向樹突狀細胞分化，激活細胞毒性T淋巴細胞，引起抗腫瘤免疫反應的重要功能結構域為CRD1和CRD2區域(Kinoshita et al.，2015)。這說明，在不同類型細胞中，行使不同生物學功能時，Dkk-3起主要作用的結構域可能并不相同。

Dkk-1能夠通過抑制Wnt信號通路從而誘導非洲爪蟾頭部發育的起始(Glinka etal.，1998)。

Dkk-2的功能也與Wnt信號通路緊密相連。但與Dkk-1不同，Dkk-2在不同細胞中，對Wnt信號通路的調控方向不同。其對Wnt信號通路的影響卻既有激活又有抑制(Wu et al.，2000)。

Dkk-4的功能與Dkk-1相似，也能通過結合LRP5/6受體，對Wnt信號通路進行負調控(Krupnik et al.，1999)。

DkkL1到目前為止，功能研究幾乎處于空白狀態。