[發明專利]一種用于鐘器腐霉的LAMP檢測引物組合物、檢測試劑盒及其可視化檢測方法

在審

• 申請號: 202010330834.4
• 申請日: 2020-04-24
• 公開（公告）號: CN111534626A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 高春生;余永廷;紀灝君;王吐虹;李智敏;陳佳;程毅;郭利桃;聶純武;文傳如
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院麻類研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種用于鐘器腐霉的LAMP檢測引物組合物，其特征在于，所述引物的序列如下：

正向外引物F3：序列如SEQ ID NO：1所示；

反向外引物B3：序列如SEQ ID NO：2所示；

正向內引物FIP：序列如SEQ ID NO：3所示；

反向內引物BIP：序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一種用于鐘器腐霉的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP檢測試劑包括權利要求1所述LAMP檢測引物組合物。

3.根據權利要求2所述的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP檢測試劑還包括BstDNA聚合酶、反應緩沖液、MgSO₄、dNTP、甜菜堿、染色指示劑中的一種或幾種。

4.根據權利要求3所述的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP檢測試劑還包括水。

5.一種鐘器腐霉的LAMP檢測方法，其特征在于，采用權利要求1至4中任一項所述LAMP檢測引物組合物對鐘器腐霉的DNA進行擴增。

6.根據權利要求5所述的LAMP檢測方法，其特征在于，所述LAMP檢測方法的反應體系如下：FIP和BIP各1.6μmol/L,F3和B3各0.2μmol/L,8U BstDNA聚合酶,2.5μL 10×反應緩沖液,6mmol/L MgSO₄,1.4mmol/L dNTPs,0.8mol/L甜菜堿,180μmol/L染色指示劑,2μL DNA模板,滅菌水補至25μL。

7.根據權利要求6所述的LAMP檢測方法，其特征在于，所述LAMP的反應溫度為64℃，反應時間為60min。

8.根據權利要求7所述的LAMP檢測方法，其特征在于，所述染色指示劑為羥基萘酚藍，所述LAMP檢測方法的判斷方法為：

反應液顏色為紫色，表示結果為陰性，待測樣品中不含鐘器腐霉；

反應液顏色為藍色，表示結果為陽性，待測樣品中含有鐘器腐霉。