[發(fā)明專利]一種鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽及在膠原水解物和其制品檢測中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010330479.0
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111751476B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設計）人: 郭尚偉;黃雅欽
• 申請（專利權(quán)）人: 北京化工大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08
• 代理公司: 北京思海天達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

一種鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽及在膠原水解物和其制品檢測中的應用，屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽Gly?Ser?Hyp?Gly?Pro?Hyp?Gly?Pro?Ser?Gly?Pro?Ala?Gly?Glu?Arg，可通過檢測該特征性Ⅲ型膠原肽，來確定是否含有鴨源性成分。具體地，通過對樣品中的蛋白成分進行胰酶酶切，使特征性Ⅲ型膠原肽游離出來，然后通過液質(zhì)聯(lián)用儀檢測是否含有該特征性Ⅲ型膠原肽，來判定是否含有鴨源性成分。該方法具有特征性強，靈敏度高，操作簡單，可對膠原水解物及其制品中的鴨源性成分進行測定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽及在膠原水解物和其制品檢測中的應用，屬于醫(yī)藥與食品檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

膠原在動物體內(nèi)含量非常豐富，主要存在于在動物的骨、皮、筋和腱等結(jié)締組織中。明膠是膠原的降解物，是由動物的骨、皮、筋和腱等為原料經(jīng)適度水解而制得，具有優(yōu)良的理化性能，廣泛應用于食品、醫(yī)藥等諸多領(lǐng)域。明膠絕大部分是由豬牛和羊的皮或骨為原材料，但由于家禽和牲畜的疾病可能帶來的安全風險、清真和宗教信仰不同，對明膠進行動物源性成分溯源具有重要意義。

明膠中主要成分為膠原蛋白多肽，可利用液質(zhì)聯(lián)用儀檢測多肽來進行動物源性成分的溯源，然而由于多肽在同一物種中存在突變等現(xiàn)象，選定的多肽能否作為溯源的標記，關(guān)系到溯源的成功與否。而對鴨源性成分溯源的特征膠原肽的選擇，不但要克服基因突變帶來的影響，而且還需在鴨中含有，而其他動物中不含有。選擇鴨中不突變的特征膠原肽，成為鴨源性成分溯源的關(guān)鍵。直接采用液質(zhì)聯(lián)用儀對樣品進行檢測分析，無法克服上述困難。從基因入手，分析尋找特征膠原肽，是一條可行的路徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述問題，提供了一種從基因角度得出的鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽及在膠原水解物和其制品中鴨源性成分的檢測方法，該方法操作簡單，特征性強，靈敏度高，可用于膠原水解物及其制品中鴨源性成分的溯源鑒定和含量測定。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種鴨源的特征性Ⅲ型膠原肽及在膠原水解物和其制品檢測中的應用，基于鴨的Ⅲ型膠原蛋白序列中包含特征膠原肽，其氨基酸序列為Gly-Ser-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ser-Gly-Pro-Ala-Gly-Glu-Arg，其中Hyp為4羥基脯氨酸或3羥基脯氨酸。它是從牛、豬、羊、雞與鴨中COL3A1蛋白的mRNA出發(fā)，找出鴨的穩(wěn)定存在的特征mRNA序列，翻譯成蛋白序列后利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測，最終選定的特征膠原肽。

該特征膠原肽在膠原水解物及其制品檢測中的應用，包括以下步驟：

(1)待檢測樣品用胰蛋白酶進行酶切，或提取待檢測樣品中的蛋白成分用胰蛋白酶進行酶切；

(2)放入液質(zhì)聯(lián)用儀，并以特征膠原肽或胰蛋白酶酶切后的鴨明膠作為對照品，選擇母離子m/z676.5及其子離子進行監(jiān)測；如果檢出該離子的保留時間與對照品一致，且其子離子與對照品的子離子一致，則所述膠原水解物或其制品含有鴨源性成分，鴨源性成分含量可由對照品與檢測樣品中的峰面積來計算；如果沒有與對照品保留時間一致的該離子，則不含有鴨源性成分。

上述在膠原水解物是由動物的皮、骨或鱗為原料經(jīng)水解所制得的明膠，膠原水解物制品是原料中含有明膠的食品、保健品或藥品。

采用本發(fā)明的方法，能夠快速檢測膠原水解物及其制品中是否含有鴨源性成分。盡管動物中存在基因突變導致蛋白序列差異，但本發(fā)明的特征膠原肽的基因在鴨中保守性強，且為鴨特有，通過該特征膠原肽，可對膠原水解物及其制品中鴨源性成分進行溯源檢測。

附圖說明

圖1是鴨明膠中特征膠原肽的子離子掃描質(zhì)譜圖(母離子m/z676.5，子離子掃描范圍m/z200～1400)；

圖2是各種動物明膠SRM掃描模式下選擇離子對m/z676.5→604.4，519.1監(jiān)測的質(zhì)譜圖；