[發(fā)明專利]多通道成像定量熒光免疫方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010327942.6
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111521776A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 范傳華;孫京海
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽華培生物科技有限公司;浙江聚視信息技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 北京興智翔達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11768
• 代理人: 郭衛(wèi)芹

本發(fā)明公開了多通道成像定量熒光免疫方法，包括有檢測裝置及其檢測方法：檢測裝置包括：數(shù)字相機(jī)和試劑卡，數(shù)字相機(jī)下端轉(zhuǎn)動安裝有鏡頭，鏡頭底部安裝有濾色片，鏡頭底部轉(zhuǎn)動安裝有鏡片固定架，鏡片固定架底部設(shè)置有若干組LED激光燈；檢測方法的步驟如下：步驟一、熒光微球標(biāo)記檢測病毒抗體。步驟二、制備包被有抗檢測病毒抗體的免疫層析試紙條。步驟三、制備洗脫液：將需要檢測的人體鼻咽部拭子取樣進(jìn)行洗脫。步驟四、熒光免疫觀察。本發(fā)明通過多組結(jié)果的共同展示，從而可以成倍的提升免疫檢測的效率，可以為后續(xù)的疾病治療留出更多的時間，該方法快速、簡單、靈敏，成本低，易于推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療熒光檢測領(lǐng)域，特別涉及多通道成像定量熒光免疫方法。

背景技術(shù)

熒光檢測是一種自然發(fā)光反應(yīng)，通過熒光素酶與ATP進(jìn)行反應(yīng)，可檢測人體細(xì)胞、細(xì)菌、霉菌、食物殘渣。熒光檢測的主要缺點在于只有少數(shù)化合物產(chǎn)生熒光。大多數(shù)的分子不發(fā)熒光，但含有可衍生的官能團(tuán)用于合成能發(fā)熒光的衍生物。

現(xiàn)有的病毒檢測方法效率低下，需要較長的時間來進(jìn)行檢測，從而對感染程度進(jìn)行明確的判斷，容易導(dǎo)致急性病癥的加重，為此，我們提出多通道成像定量熒光免疫方法來解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于。

本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：

多通道成像定量熒光免疫方法，包括有檢測裝置及其檢測方法：

檢測裝置包括：數(shù)字相機(jī)和試劑卡，所述數(shù)字相機(jī)為儀器級數(shù)字相機(jī)，所述數(shù)字相機(jī)下端轉(zhuǎn)動安裝有鏡頭，所述鏡頭底部安裝有濾色片，通過濾色片對數(shù)字相機(jī)內(nèi)發(fā)出的光進(jìn)行過濾，所述鏡頭底部轉(zhuǎn)動安裝有鏡片固定架，所述鏡片固定架底部設(shè)置有若干組LED激光燈。

進(jìn)一步的，所述試劑卡包括有側(cè)視面板，所述側(cè)視面板為塑料材質(zhì)，所述側(cè)視面板左側(cè)設(shè)置有加樣區(qū)，所述側(cè)視面板右側(cè)設(shè)置有檢測區(qū)，所述檢測區(qū)等距離分布有若干組測試條，所述加樣區(qū)中部設(shè)置有若干組加樣口，所述加樣口用于將檢測樣本注入，每一組所述加樣口對應(yīng)有一組測試條。

進(jìn)一步的，所述測試條設(shè)置有檢測線和質(zhì)控線，所述質(zhì)控線為設(shè)計檢測的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)結(jié)果，所述檢測線為實際的樣品檢測結(jié)果，通過將質(zhì)控線和檢測線進(jìn)行對比，可以直觀的對測試結(jié)果進(jìn)行觀察，所述試劑卡可以實現(xiàn)同時對多組樣品的同時檢測，通過多組結(jié)果的共同展示，從而可以成倍的提升免疫檢測的效率，可以為后續(xù)的疾病治療留出更多的時間。

上述檢查裝置的檢測方法的步驟如下：

步驟一、熒光微球標(biāo)記檢測病毒抗體

用活化液替換原有保存液：離心－去上清－活化液超聲重懸；加入EDC進(jìn)行活化，EDC是個可溶于水的碳二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑，也用于活化磷酸酯基團(tuán)、蛋白質(zhì)與核酸的交聯(lián)和免疫偶連物的制取；稱取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋轉(zhuǎn)反應(yīng)15min；去除未反應(yīng)或殘余的反應(yīng)物：離心－去上清－超純水超聲重懸，重復(fù)3次；用反應(yīng)液超聲重懸微球，然后加入一定量的待標(biāo)記蛋白，避光反應(yīng)1～4小時；去除未偶聯(lián)的蛋白：離心－去上清－超聲重懸，重復(fù)1～2次，2～8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

步驟二、制備包被有抗檢測病毒抗體的免疫層析試紙條

將檢測病毒抗體及羊抗鼠二抗噴涂在試劑卡，具體是涂抹在加樣區(qū)，37℃干燥箱干燥過夜。

步驟三、制備洗脫液

將需要檢測的人體鼻咽部拭子取樣進(jìn)行洗脫，洗脫液包括：表面活性劑1mM～3mM；緩沖液10mM～1M；數(shù)字相機(jī)蛋白酶抑制劑3mM～10mM。

步驟四、熒光免疫觀察