[發(fā)明專利]多通道成像定量熒光免疫方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010327942.6
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111521776A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 范傳華;孫京海
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽華培生物科技有限公司;浙江聚視信息技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/533;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 北京興智翔達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11768
• 代理人: 郭衛(wèi)芹

1.多通道成像定量熒光免疫方法的檢測裝置，其特征在于：所述檢測裝置包括：數(shù)字相機(1)和試劑卡(6)，所述數(shù)字相機(1)為儀器級數(shù)字相機，所述數(shù)字相機(1)下端轉(zhuǎn)動安裝有鏡頭(2)，所述鏡頭(2)底部安裝有濾色片(3)，所述鏡頭(2)底部轉(zhuǎn)動安裝有鏡片固定架(4)，所述鏡片固定架(4)底部設(shè)置有若干組LED激光燈(5)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多通道成像定量熒光免疫檢測裝置，其特征在于：所述試劑卡(6)包括有側(cè)視面板(61)，所述側(cè)視面板(61)為塑料材質(zhì)，所述側(cè)視面板(61)左側(cè)設(shè)置有加樣區(qū)(62)，所述側(cè)視面板(61)右側(cè)設(shè)置有檢測區(qū)(63)，所述檢測區(qū)(63)等距離分布有若干組測試條(64)，所述加樣區(qū)(62)中部設(shè)置有若干組加樣口(67)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多通道成像定量熒光免疫檢測裝置，其特征在于：所述測試條(64)設(shè)置有檢測線(65)和質(zhì)控線(66)。

4.多通道成像定量熒光免疫方法，其特征在于：所述檢查裝置的檢測方法的步驟如下：

步驟一、熒光微球標(biāo)記檢測病毒抗體

用活化液替換原有保存液：離心－去上清－活化液超聲重懸；加入EDC進行活化，EDC是個可溶于水的碳二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑，也用于活化磷酸酯基團、蛋白質(zhì)與核酸的交聯(lián)和免疫偶連物的制取；稱取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋轉(zhuǎn)反應(yīng)15min；去除未反應(yīng)或殘余的反應(yīng)物：離心－去上清－超純水超聲重懸，重復(fù)3次；用反應(yīng)液超聲重懸微球，然后加入一定量的待標(biāo)記蛋白，避光反應(yīng)1～4小時；去除未偶聯(lián)的蛋白：離心－去上清－超聲重懸，重復(fù)1～2次，2～8℃保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二、制備包被有抗檢測病毒抗體的免疫層析試紙條

將檢測病毒抗體及羊抗鼠二抗噴涂在試劑卡(6)，具體是涂抹在加樣區(qū)(62)，37℃干燥箱干燥過夜；

步驟三、制備洗脫液

將需要檢測的人體鼻咽部拭子取樣進行洗脫，洗脫液包括：表面活性劑1mM～3mM；緩沖液10mM～1M；數(shù)字相機蛋白酶抑制劑3mM～10mM；

步驟四、熒光免疫觀察

取出所需免疫層析試紙條，室溫放置15min；每孔加入50-70ull質(zhì)控品，置于熒光檢測儀孵育倉；15min后，打開數(shù)字相機(1)自動檢測。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多通道成像定量熒光免疫方法，其特征在于：所述步驟二中將涂抹樣品后試機卡(6)熒光微球標(biāo)記抗檢測病毒抗體偶聯(lián)物噴在結(jié)合墊上，30℃真空干燥2h；加干燥劑于4～30℃密封保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多通道成像定量熒光免疫方法，其特征在于：所述步驟三中的表面活性劑為Tween鏡頭20，聚乙二醇辛基苯基醚緩沖液和十二烷基磺酸鈉按照5:3:1的比例均勻混合后得到；所述緩沖液為磷酸鹽溶液，三羥甲基氨基甲烷溶液或碳酸鹽溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多通道成像定量熒光免疫方法，其特征在于：所述步驟四中檢測結(jié)果以校準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，發(fā)光值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)邏輯擬合法得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算待檢樣本中甲乙流感病毒檢測含量。