[發明專利]一種類I型膠原蛋白纖維的制備方法

有效

• 申請號: 202010327199.4
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111333715B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 許菲;胡金遠;維卡斯·南達;戴維·史瑞伯;張萌;鎖娜兒·格拉瓦特
• 申請（專利權）人: 江南大學;羅格斯大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/06;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種用于表達類I型膠原蛋白的蛋白單鏈，其特征在于，氨基酸序列如所示；其中，V-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；(GPP)n中的5＜n≤30；CL-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.2~6任一序列所示。

2.根據權利要求1所述的蛋白單鏈，其特征在于，所述V-domain和(GPP)n之間通過LVPRGSP連接。

3.根據權利要求2所述的蛋白單鏈，其特征在于，所述V-domain前端具有6×His標簽。

4.編碼權利要求1~3任一所述蛋白單鏈的基因。

5.攜帶權利要求4所述基因的質粒或細胞。

6.根據權利要求5所述的質粒，其特征在于，包括：pColdIII系列或pET系列的質粒。

7.根據權利要求5所述的細胞，其特征在于，為大腸桿菌細胞，包括E. coli BL21、E. coli BL21（DE3）、E. coli JM109、E. coli DH5α或E. coli TOP10。

8.類I型膠原蛋白，其特征在于，由三條如所示的蛋白單鏈圍繞一個共同的中心軸盤繞，構成三螺旋結構；

其中，V-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；(GPP)n中的5＜n≤30；CL-domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.2~6任一序列所示。

9.由權利要求8所述類I型膠原蛋白高聚自組裝形成的膠原蛋白纖維。

10.一種類I型膠原蛋白纖維的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）合成編碼權利要求1所述類I型膠原蛋白的蛋白單鏈的基因；

（2）將步驟（1）所述基因與載體連接，轉化至目的細胞中表達并純化；

（3）向步驟（2）的純化產物中加入胰蛋白酶，于20~25℃溫度下反應至少6 h；

（4）將步驟（3）獲得的膠原蛋白配制成濃度為0.1~1 mmol/L的溶液，于2℃~37℃靜置。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）的基因的核苷酸序列如SEQID NO.13~15，17~18任一所示。

12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）的靜置時間不少于24 h。

13.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）是凍干后的膠原蛋白配制成濃度為0.5 mmol/L的溶液，于4℃~37℃靜置至少2天。

14.權利要求1~3任一所述的類I型膠原蛋白單鏈，或權利要求4所述的基因，或權利要求5~7任一所述的質粒或細胞，或權利要求8所述的類I型膠原蛋白，或權利要求9所述的膠原蛋白纖維，或權利要求10~13任一所述的制備方法在制備含有膠原蛋白的產品方面的應用。