[發明專利]一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法

在審

• 申請號: 202010324291.5
• 申請日: 2020-04-22
• 公開（公告）號: CN111595955A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 莊緒亮;劉穎;高婕;白志輝;吳尚華;莊國強
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 張擁

本說明書一個或多個實施例提供一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，通過超高效液相色譜?三重四級桿質譜串聯飛行時間質譜技術，采用多反應監測模式，使用與目標物質DSF與BDSF母離子相同的離子作為子離子，進行質譜信號的采集。本說明書一個或多個實施例建立了嗜根寡養單胞菌中信號分子DSF與BDSF檢測的定性定量方法，該方法高效、準確、選擇性強、靈敏度高，適用范圍廣。

技術領域

本說明書一個或多個實施例涉及細菌群體感應信號分子檢測技術領域，尤其涉及一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法。

背景技術

群體感應是細菌之間的交流方式，依賴于細菌的種群密度，通過感應細菌所產生的信號分子而調控細菌的生長，以群體形式對寄主和外部環境做出協同反應。可擴散性信號分子DSF(順式-11-甲基-2-十二碳烯酸)與BDSF(順式-2-十二碳烯酸)是細菌群體感應系統DSF家族的主要信號分子，此類不飽和脂肪酸信號分子在一系列革蘭氏陰性菌中調節多種生物功能，細菌通過產生和感應DSF類信號分子進行廣泛的信息交流，形成生物膜，產生胞外多糖等。目前的研究認為調控致病因子(regulation of pathogenicity factors,rpf)基因簇參與DSF類信號分子的合成與應答。

嗜根寡養單胞菌(Stenotrophomonas rhizophila DSM14405^T)為革蘭氏陰性細菌，是一種耐鹽抗旱并為植物提供防御病原體能力的根際促生菌，屬于黃單胞菌科，其基因組含有DSF類信號分子相關的rpf基因簇，有rpfF基因，具有產生DSF類信號分子的潛能，但尚未通過實驗證明。

目前國內外檢測DSF類信號分子的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜串聯質譜法(HPLC-MS)。但是上述方法選擇性較低，當基質較為復雜時，無法進行準確的分離鑒定。

發明內容

有鑒于此，本說明書一個或多個實施例的目的在于提出一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法。

基于上述目的，本說明書一個或多個實施例提供了一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，通過超高效液相色譜-三重四級桿質譜串聯飛行時間質譜技術，采用多反應監測模式，使用與目標物質DSF與BDSF母離子相同的離子作為子離子，進行質譜信號的采集；

其中，所述DSF的結構式如下所示：

所述BDSF的結構式如下所示：

本說明書一個或多個實施例中，可選的，所述DSF與BDSF的母離子[M-H]^-分別為m/z 211.1和m/z 197.1。

本說明書一個或多個實施例中，可選的，利用乙腈溶解DSF與BDSF。

本說明書一個或多個實施例中，可選的，所述高效液相色譜的條件為：流動相A為含有緩沖溶液的水溶液，緩沖溶液與水溶液的體積比5:100；流動相B為緩沖溶液、乙腈和異丙醇，緩沖溶液、乙腈與異丙醇的體積比為5:55:45；其中，緩沖溶液的配制為：用濃氨水調節100mM冰醋酸至pH＝5。

本說明書一個或多個實施例中，可選的，所述高效液相色譜的梯度洗脫程序為：0～6min，70％B～100％B，6～8min，100％B，8～10min，100％～70％B；流速0.2～0.5ml/min，柱溫32～38℃。

本說明書一個或多個實施例中，可選的，所述質譜的條件為：電噴霧離子源，負離子檢測模式，霧化器流速2～4L/min，加熱器流速8～12L/min，干燥器流速8～12L/min，離子源接口溫度280～320℃，DL溫度240～260℃，加熱模塊溫度390～410℃；