[發明專利]一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法

在審

• 申請號: 202010324291.5
• 申請日: 2020-04-22
• 公開（公告）號: CN111595955A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 莊緒亮;劉穎;高婕;白志輝;吳尚華;莊國強
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 張擁

1.一種同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，通過超高效液相色譜-三重四級桿質譜串聯飛行時間質譜技術，采用多反應監測模式，使用與目標物質DSF與BDSF母離子相同的離子作為子離子，進行質譜信號的采集；

其中，所述DSF的結構式如下所示：

所述BDSF的結構式如下所示：

2.根據權利要求1所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，所述DSF與BDSF的母離子[M-H]^-分別為m/z 211.1和m/z 197.1。

3.根據權利要求1所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，利用乙腈溶解DSF與BDSF。

4.根據權利要求1所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的條件為：流動相A為含有緩沖溶液的水溶液，緩沖溶液與水溶液的體積比5:100；流動相B為緩沖溶液、乙腈和異丙醇，緩沖溶液、乙腈與異丙醇的體積比為5:55:45；其中，緩沖溶液的配制為：用濃氨水調節100mM冰醋酸至pH＝5。

5.根據權利要求4所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，所述高效液相色譜的梯度洗脫程序為：0～6min，70％B～100％B，6～8min，100％B，8～10min，100％～70％B；流速0.2～0.5ml/min，柱溫32～38℃。

6.根據權利要求1所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，所述質譜的條件為：電噴霧離子源，負離子檢測模式，霧化器流速2～4L/min，加熱器流速8～12L/min，干燥器流速8～12L/min，離子源接口溫度280～320℃，DL溫度240～260℃，加熱模塊溫度390～410℃；

多反應監測模式的參數為：目標物質DSF，檢測離子對為：母離子m/z 211.1和子離子m/z 211.1，駐留時間20msec，Q1預四級偏置電壓15V，碰撞能量7eV，Q3預四級偏置電壓24V；

目標物質BDSF，檢測離子對為：母離子m/z 197.1和子離子m/z 197.1，駐留時間100msec，Q1預四級偏置電壓14V，碰撞能量8eV，Q3預四級偏置電壓22V。

7.根據權利要求1-6任一項所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)標準溶液的配制

用乙腈分別溶解DSF與BDSF，分別得到DSF的儲液與BDSF的儲液；

(2)混合標準溶液的配制

將DSF的儲液與BDSF的儲液混合并用乙腈逐級梯度稀釋定容；

(3)待測樣品的處理

將嗜根寡養單胞菌的培養液進行離心，取上清液，調節上清液的pH值，加入有機溶劑進行超聲萃取，將萃取后的溶液靜置過夜，然后旋轉蒸發，氮吹，乙腈復溶，過濾，得到待測樣品；

(4)待測樣品和混合標準溶液的檢測

通過超高效液相色譜-三重四級桿質譜串聯飛行時間質譜技術，采用多反應監測模式，使用與目標物質DSF與BDSF母離子相同的離子作為子離子，進行待測樣品和混合標準溶液的質譜信號的采集。

8.根據權利要求7所述的同步檢測嗜根寡養單胞菌群體感應信號分子DSF與BDSF的方法，其特征在于，以梯度混合標準液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制DSF的標準工作曲線和BDSF的標準工作曲線，將待測樣品中DSF和BDSF的峰面積分別代入DSF的標準工作曲線和BDSF的標準工作曲線中，分別得到待測樣品中DSF的濃度和BDSF的濃度。