[發明專利]CHOK1懸浮馴化無血清培養基及懸浮馴化方法在審
| 申請號： | 202010320852.4 | 申請日： | 2020-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN111471644A | 公開（公告）日： | 2020-07-31 |
| 發明（設計）人： | 許園元;高云霞;董庸行;宋彥凌 | 申請（專利權）人： | 常州艾米能斯生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258 | 代理人： | 王美華 |
| 地址： | 213000 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | chok1 懸浮 馴化 血清 培養基 方法 | ||
2.一種CHOK1細胞懸浮馴化方法，其特征在于：包括如下步驟：
步驟1，貼壁轉懸?。菏褂肍-12K+10％FBS培養細胞，細胞匯合度達到70-80％，加胰酶消化，緩慢吹打混勻，按0.5×106cells/ml接種至含10％FBS的F-12K培養基中搖瓶傳代，2天后細胞密度達到1×106cells/ml，水平離心5±1min收集細胞；
步驟2，懸浮馴化恢復：將步驟1中搖床搖床傳代后收集的細胞以0.5×106cells/ml密度接種到如權利要求1所述的CHOK1懸浮馴化無血清培養基，繼續搖床懸浮培養，5天后細胞增殖為1.6×106cells/ml，細胞活率達到88.88％，直接取懸液以0.5×106cells/ml傳代，4天后細胞活率為92.6％，接下來取懸液以0.8×106cells/ml密度傳代，連續傳3代后，完成CHOK1細胞基本馴化；接下來以0.3×106cells/ml傳代，每3天傳代一次，連續傳3代，細胞倍增時間穩定在23～24h，細胞懸浮馴化完成。
3.根據權利要求2所述的CHOK1細胞懸浮馴化方法，其特征在于：步驟1中搖瓶傳代培養條件為于37±0.5℃，5±0.5％CO2，125±5rpm搖床中懸浮培養。
4.根據權利要求2所述的CHOK1細胞懸浮馴化方法，其特征在于：步驟1中細胞收集方法為取細胞密度達到1×106cells/ml的細胞懸液，水平離心5±1min后，收集細胞沉淀。
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