[發明專利]STXBP1突變動物模型的構建及其應用

有效

• 申請號: 202010317918.4
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN113528584B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 孫強;陸宗陽;劉真;熊志奇;姜建
• 申請（專利權）人: 中國科學院腦科學與智能技術卓越創新中心
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;徐迅

本發明涉及STXBP1突變動物模型的構建及其應用。具體地，本發明提供了一種非人哺乳動物的早期嬰兒癲癇性腦病動物模型的制備方法，包括步驟：(a)提供非人哺乳動物的細胞，對所述細胞中的Stxbp1基因進行點突變，從而得到Stxbp1基因點突變的細胞；(b)利用步驟(a)中得到的Stxbp1基因點突變的細胞，制備具有Stxbp1基因點突變的動物模型；其中，在所述的動物模型中，Stxbp1基因點突變是雜合型。本發明的突變雜合猴，能表現出早期嬰兒癲癇性腦病的癲癇行為和EIEE的典型EEG表型。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體地，本發明涉及STXBP1突變動物模型的構建及其應用。

背景技術

早期嬰兒癲癇性腦病(EIEE)又被稱為大田原綜合征，是一種劇烈的兒童癲癇病，通常伴隨有STXBP1基因的突變。它的特征是肌肉痙攣，頑固性癲癇發作，腦電圖(EEG)波抑制爆發型，嚴重精神病和運動障礙。迄今為止，在EIEE患者中已鑒定出數百種STXBP1雜合突變。小鼠Stxbp1編碼突觸前蛋白Munc18-1，該蛋白與其“關閉”狀態的伴侶蛋白syntaxin-1結合以相互促進穩定,并與“打開”狀態的syntaxin-1蛋白和SNARE復合物相互作用，以加快SNARE介導的遞質釋放和突觸小泡的膜融合的速率。然而，攜帶Stxbp1突變的小鼠表現出相對輕微的表型，例如焦慮和肌肉痙攣，并沒有觀察到嚴重的癲癇發作和在嬰兒患者中出現的典型的爆發抑制腦電模式。

CRISPR/Cas9編輯方法已用于多種神經疾病(例如睡眠障礙，自閉癥譜系障礙和帕金森氏病)非人靈長類模型的構建。CRISPR/Cas9可介導DNA序列的插入或缺失(indels)，但許多遺傳疾病攜帶的是點突變而不是indel。

因此，本領域迫切需要開發一種能夠表現出EIEE的行為和EEG表型的非人類靈長類動物模型，該模型可用于研究其發病機理和開發治療方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種能夠表現出EIEE的行為和EEG表型的非人類靈長類動物模型，該模型可用于研究其發病機理和開發治療方法。

本發明另一目的在于提供了一種獲得癲癇靈長類模型的sgRNA和編輯編輯器的載體組合；提供了構建好的非人靈長類癲癇模型，該模型可被用于臨床藥物開發。

本發明第一方面提供了一種非人哺乳動物的早期嬰兒癲癇性腦病動物模型的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(a)提供非人哺乳動物的細胞，對所述細胞中的Stxbp1基因進行點突變，從而得到Stxbp1基因點突變的細胞；

(b)利用步驟(a)中得到的Stxbp1基因點突變的細胞，制備具有Stxbp1基因點突變的動物模型；

其中，在所述的動物模型中，Stxbp1基因點突變是雜合型。

在另一優選例中，所述的Stxbp1基因點突變包括：將STXBP1蛋白的第292位的氨基酸R突變為選自下組的一種或多種氨基酸所形成的點突變：His(H)、Lys(K)。

在另一優選例中，所述的Stxbp1基因點突變包括：將STXBP1蛋白的第292位的氨基酸R突變為H。

在另一優選例中，所述STXBP1基因點突變是將STXBP1蛋白的292位的氨基酸R突變為H。

在另一優選例中，所述STXBP1基因點突變是將SEQ?ID?No.:1中的第292位R突變為H。

在另一優選例中，所述STXBP1蛋白來源于非人靈長類動物，較佳地，來源于猴或黑猩猩，更佳地，來源于食蟹猴。

在另一優選例中，所述非人哺乳動物包括非人靈長類動物。

在另一優選例中，所述非人靈長類動物包括猴、黑猩猩。