[發明專利]同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202010317906.1
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111398480A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 蔡克亞;耿瑞;劉亞娟;趙高嶺
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 韓華

本發明公開了一種同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的試劑盒，包括提取液、稀釋液、流動相、校準品和質控品，其中：所述校準品和質控品包括氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑、萬古霉素和替考拉寧；所述提取液包括同位素內標物和甲醇水溶液，所述同位素內標包括氟康唑?d4、伏立康唑?d3、泊沙康唑?d4和伊曲康唑?d5；所述稀釋液為蒸餾水或超純水。本發明的優點在于首次提出了一種既可以檢測小分子抗真菌藥物，同時還能檢測大分子糖肽類抗生素的試劑盒，樣品前處理簡單，前處理時間短，提高了檢測效率，檢出藥物種類多，能夠滿足臨床上高通量樣品的檢測需求，具有很好的應用前景，便于推廣和普及。

技術領域

本發明涉及臨床檢測領域，尤其是涉及一種同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的試劑盒，還涉及一種利用該試劑盒同時檢測血漿、血清中三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的方法。

背景技術

目前，侵襲性真菌感染已經成為導致重癥患者發病率和死亡率提升的主要因素，如由曲霉菌引起的侵襲性肺疾病的死亡率高達82%。臨床使用的抗真菌藥物主要是三唑類抗真菌藥物（屬于小分子藥物），主要包括氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和伊曲康唑。此外，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）也是臨床上常見的毒性較強的細菌，它已成為院內和社區感染的重要病原菌之一，臨床使用的抗MRSA藥物主要是糖肽類抗生素（屬于大分子藥物），包括萬古霉素和替考拉寧。然而，由于三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素不僅具有較大的個體間和個體內差異，并且血藥濃度還與治療效果密切相關，導致臨床上出現許多由于血藥濃度過低引起的治療失敗或由血藥濃度過高引起的毒性現象。因此，通過檢測患者血藥濃度來指導臨床給藥方案具有重要意義。

糖肽類抗生素的檢測方法主要有熒光偏振免疫分析法（即FPIA），FPIA是利用待測樣本中的化合物與用熒光標記的待測物與有限量的特異性大分子抗體進行競爭結合；當待測物濃度高時，經過競爭反應，大部分待測物與抗體結合而熒光標記的小分子多呈游離狀態，因此熒光偏振程度較低；反之，則熒光偏振程度較高。在檢測時通過檢測待測樣品的偏振光大小，確定樣品中大分子抗生素的含量。但是，目前大多數抗體在測定分子結構相似的化合物時，特別容易引起交叉反應，對于低濃度的待測物準確性較低；并且替考拉寧的商業化免疫分析產品銷售地區有限，并不能實現普及檢測。

免疫分析對小分子化合物的檢測有先天缺陷，即使采用單克隆抗體，這些抗體對小分子化合物的單個分子結構精確識別也存在很大困難。所以，現有抗真菌藥物的檢測方法主要采用HPLC和LC-MS/MS法等。HPLC可進行定性和定量分析，但其分離度需要在1.5以上才能實現定量，所以在樣品前處理時往往需要進行萃取或衍生化步驟，操作繁瑣，分析時間比較長，難以滿足臨床上大批量樣本的快速診斷需求。

LC-MS/MS是先對化合物進行色譜分離，經色譜分離的化合物根據保留時間先后在離子源形成帶電離子，串聯質譜再根據母離子和碎片離子的質核比進行檢測。即LC-MS/MS能夠同時檢測化合物的保留時間和質荷比，所以其具有更高的特異性和較高的分離效率，廣泛用于小分子抗真菌藥物的檢測，如CN105784865A公開了一種檢測動物血漿中氟唑沙宗的HPLC- MS /MS方法；CN10903067A公開了一種同時測定干血斑中四種抗真菌藥物的試劑盒及其應用。但是，由于三唑類抗真菌藥物與糖肽類抗生素藥物的理化性質差別較大，目前未出現有關利用LC-MS/MS同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的報道。

發明內容

本發明目的在于提供一種同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的試劑盒，還提供了一種利用該試劑盒測定血漿、血清中三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的方法，實現了小分子抗真菌藥物和糖肽類大分子抗生素的同時測定。

為實現上述目的，本發明采取下述技術方案：

本發明所述的同時檢測三唑類抗真菌藥物和糖肽類抗生素的試劑盒，包括提取液、稀釋液、流動相、校準品和質控品，其中：

所述校準品和質控品包括氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑、萬古霉素和替考拉寧；