[發(fā)明專利]膀胱活動(dòng)低下動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010316779.3
• 申請(qǐng)日: 2020-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN111419463A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈瑞鵬;周六化;徐忠樂;許露偉;趙峰;周昌成;吳然
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京市第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61D1/00
• 分類號(hào): A61D1/00;A61D7/00;A01K67/02
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 蔣廈

本發(fā)明涉及一種膀胱活動(dòng)低下動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法，選取SPF級(jí)雄性SD大鼠，在合適的飼養(yǎng)條件下，將大鼠隨機(jī)分成5組，其中第1組為假手術(shù)sham組，假手術(shù)sham組大鼠僅暴露膀胱頸，不予結(jié)扎；第2組?第5組均通過改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型；在第2組?第5組中，第2組為對(duì)照組，僅采用改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型，第3組?第5組再分別給予不同劑量的TGF?β1進(jìn)行膀胱漿膜層多點(diǎn)注射。本發(fā)明提供了一種膀胱活動(dòng)低下動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法，采用改良的方法建立PBOO模型結(jié)合膀胱漿膜層多點(diǎn)注射TGF?β1，成功誘導(dǎo)UAB模型的建立，且操作簡便可控、成功率高、模型穩(wěn)定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種膀胱活動(dòng)低下動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法。

背景技術(shù)

膀胱活動(dòng)低下(Underactive bladder,UAB)是一種與膀胱逼尿肌活動(dòng)低下(Detrusor underactivity,DU)相關(guān)的常見、慢性、復(fù)雜性泌尿系統(tǒng)疾病。患者通常伴有明顯的下尿路癥狀，如排尿等待、排尿費(fèi)力、尿流遲緩、膀胱排空不完全，患者還存在不同程度的膀胱充盈感覺異常，易導(dǎo)致膀胱殘余尿量增加、慢性尿潴留等，顯著增加了泌尿系統(tǒng)感染、結(jié)石以及腎功能衰竭發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。在70歲以上老年男性中，其發(fā)病率可高達(dá)48％。而且，89％的人群目前并不知曉自身存在的DU或者UAB，因此其實(shí)際發(fā)病率可能更高。目前，臨床上對(duì)于UAB尚無有效的治療方法。通過建立UAB的動(dòng)物模型，明確UAB的病理生理學(xué)變化，對(duì)UAB的治療具有重要的指導(dǎo)價(jià)值。

UAB的病因復(fù)雜，包括肌源性因素導(dǎo)致的膀胱逼尿肌功能受損，如膀胱出口梗阻(Bladder outlet obstruction,BOO)、糖尿病等；神經(jīng)源性因素，如膀胱傳入、傳出神經(jīng)以及腰骶脊髓、中樞神經(jīng)損傷等。其中，BOO為導(dǎo)致UAB的一個(gè)重要肌源性因素。目前，BOO動(dòng)物模型的建立方法主要采用袖套法、銀夾法、線扎法等。然而，袖套法和銀夾法的游離范圍大、創(chuàng)傷大，動(dòng)物死亡率高，線扎法一般需要經(jīng)尿道置入導(dǎo)管，易損傷尿道，引起尿道水腫、纖維化等問題。此外，BOO演變?yōu)閁AB仍需要較長的時(shí)間，個(gè)體差異較大，導(dǎo)致難以建立穩(wěn)定的UAB動(dòng)物模型，成功率低下。

轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)是一種重要的促纖維化因子，與多種組織器官纖維化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，UAB膀胱組織中TGF-β1表達(dá)明顯升高，提示TGF-β1在UAB的進(jìn)展中具有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明采用了一種改良的線扎法，同時(shí)結(jié)合外源性TGF-β1的應(yīng)用，以提供一種操作簡便可控、成功率高、模型穩(wěn)定的UAB動(dòng)物模型建立的新方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：

一種膀胱活動(dòng)低下動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)方法，選取SPF級(jí)雄性SD大鼠，在合適的飼養(yǎng)條件下，將大鼠隨機(jī)分成5組，其中第1組為假手術(shù)sham組，假手術(shù)sham組大鼠僅暴露膀胱頸，不予結(jié)扎；第2組-第5組均通過改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型；在第2組-第5組中，第2組為對(duì)照組，僅采用改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型，第3組-第5組在建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型的基礎(chǔ)上再分別給予不同劑量的TGF-β1進(jìn)行膀胱漿膜層多點(diǎn)注射；術(shù)后對(duì)5組大鼠通過膀胱壓力/流率測(cè)定、離體肌條張力測(cè)定、膀胱濕重測(cè)定、Masson染色檢測(cè)，以評(píng)價(jià)該組大鼠是否進(jìn)展為UAB。

選取SPF級(jí)雄性SD大鼠的條件為選8周齡，體重160-180g的大鼠。

大鼠的飼養(yǎng)條件為：溫度24±2℃、濕度50％-70％，12h間斷照明。

2-5組改良的方法為：大鼠禁食水8h，麻醉、備皮、消毒，經(jīng)下腹部正中切口，暴露膀胱并鈍性分離，找到膀胱頸，采用10ml注射器針頭D＝0.96mm與尿道平行方向置于緊貼膀胱出口水平，3-0絲線結(jié)扎膀胱頸口，絲線拉力強(qiáng)度設(shè)置為0.2kg，仔細(xì)拔除針頭，關(guān)閉切口。