[發明專利]膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法

在審

• 申請號: 202010316779.3
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111419463A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 賈瑞鵬;周六化;徐忠樂;許露偉;趙峰;周昌成;吳然
• 申請（專利權）人: 南京市第一醫院
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00;A61D7/00;A01K67/02
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 蔣廈

1.一種膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：選取SPF級雄性SD大鼠，在合適的飼養條件下，將大鼠隨機分成5組，其中第1組為假手術sham組，假手術sham組大鼠僅暴露膀胱頸，不予結扎；第2組-第5組均通過改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型；在第2組-第5組中，第2組為對照組，僅采用改良的方法建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型，第3組-第5組在建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型的基礎上再分別給予不同劑量的TGF-β1進行膀胱漿膜層多點注射；術后對5組大鼠通過膀胱壓力/流率測定、離體肌條張力測定、膀胱濕重測定、Masson染色檢測，以評價該組大鼠是否進展為UAB。

2.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：選取SPF級雄性SD大鼠的條件為選8周齡，體重160-180g的大鼠。

3.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：大鼠的飼養條件為：溫度24±2℃、濕度50％-70％，12h間斷照明。

4.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：2-5組改良的方法為：鼠禁食水8h，麻醉、備皮、消毒，經下腹部正中切口，暴露膀胱并鈍性分離，找到膀胱頸，采用10ml注射器針頭D＝0.96mm與尿道平行方向置于緊貼膀胱出口水平，3-0絲線結扎膀胱頸口，絲線拉力強度設置為0.2kg，仔細拔除針頭，關閉切口。

5.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：第3組-第5組在建立膀胱出口部分梗阻PBOO模型的基礎上分別給予0.5、1.0、5.0μg TGF-β1進行膀胱漿膜層多點注射，即第3組-第5組分別為0.5ug注射組、1.0ug注射組和5.0ug注射組。

6.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：TGF-β1的膀胱漿層多點注射方法為：PBOO模型建立的同時，選擇不同劑量的TGF-β1，溶解于100ul的溶液中，從膀胱頸口至膀胱頂部，沿冠狀面進行多點注射。

7.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：膀胱壓力/流率測定方法為：術后4、6周，暴露膀胱，頂部置入PE50管并固定；72h后，在大鼠清醒狀態下，經三通管一端連接微量注射泵，以0.1ml/min注射37℃預熱生理鹽水，另一端連接壓力換能器，采用多通道生理采集器采集數據。

8.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：離體肌條張力測定方法為：取新鮮膀胱組織，制作2mm×10mm肌條，固定于含Krebs液的器官浴槽中，37℃循環加熱，穩定20min，進行電刺激，參數為10v，2ms，90Hz，間隔15s，經張力換能器轉換后，采用多通道生理采集器分析張力變化曲線。

9.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：膀胱濕重測定方法為：取出各組大鼠膀胱，擠壓出膀胱全部尿液，置電子天平上，記錄膀胱凈重。

10.根據權利要求1所述的膀胱活動低下動物模型的建立與評價方法，其特征在于：Masson染色方法為：將膀胱組織進行甲醛固定、石蠟包埋、切片，然后進行Masson染色，顯微鏡觀察分析。