[發明專利]一種表達大鼠β-防御素2的載體、乳酸乳球菌及其應用在審
| 申請號： | 202010316587.2 | 申請日： | 2020-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN111500616A | 公開（公告）日： | 2020-08-07 |
| 發明（設計）人： | 宗亞楠;吳長毅;張利萍;韓登陽;李正遷;郭向陽 | 申請（專利權）人： | 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院） |
| 主分類號： | C12N15/74 | 分類號： | C12N15/74;C12N15/66;C12N1/21;A61K35/744;A61P31/04;A61P11/00;A61P1/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 焦作加貝專利代理事務所(普通合伙) 41182 | 代理人： | 馮新志 |
| 地址： | 100191 北京市海*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 大鼠 防御 載體 乳酸 球菌 及其 應用 | ||
1.一種表達大鼠β-防御素2的載體，其特征在于，所述載體是包含β-防御素2編碼核苷酸序列的pSEC表達載體。
2.根據權利要求1所述的表達大鼠β-防御素2的載體，其特征在于，所述β-防御素2編碼核苷酸序列是利用特異性引物對從大鼠肺組織中擴增得到的。
3.根據權利要求2所述的表達大鼠β-防御素2的載體，其特征在于，所述特異性引物對包括具有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的下游引物。
4.構建權利要求1所述表達大鼠β-防御素2的載體的方法，其特征在于，包括以下步驟：
提取大鼠肺組織RNA，并逆轉錄成cDNA；
以步驟（1）獲得的cDNA為模板，利用特異性引物對擴增大鼠BD-2基因片段；
將步驟（2）擴增得到的β-防御素2基因片段克隆至pGEM載體，得到第一重組載體pGEM-BD-2；
將第一重組載體pGEM-BD-2雙酶切，回收BD-2片段；
雙酶切pSEC表達載體，并與BD-2片段進行連接，得到第二重組載體pSEC-BD-2，即得到能夠表達大鼠β-防御素2的載體。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述特異性引物對包括具有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的下游引物。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述雙酶切用到的限制性內切酶分別是
7.包含權利要求1-3任一所述表達大鼠β-防御素2的載體的乳酸乳球菌。
8.根據權利要求7所述的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌為乳酸乳球菌NZ9000。
9.根據權利要求7所述的乳酸乳球菌，其特征在于，利用電穿孔法將所述能夠表達大鼠β-防御素2的載體導入所述乳酸乳球菌中。
10.權利要求7所述的乳酸乳球菌在制備用于治療膿毒癥的藥物中的應用。
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