[發(fā)明專利]一種有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010315468.5
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111304292A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱淑斌;倪黎綱;徐盼;趙旭庭;高慧珍
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學院
• 主分類號: C12Q1/6809
• 分類號: C12Q1/6809
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐卿

本發(fā)明提供一種有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法，涉及生物分子技術(shù)領(lǐng)域。該有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法，包括選取試驗材料，采集DNA樣本，獲取引物對，PCR擴增，多態(tài)性檢測和人工合成基因。通過提取母豬的DNA樣本，并進行PCR擴增和RFLP分析后，可以直接獲得產(chǎn)仔數(shù)多和抗病力強兩種有利于豬繁殖的優(yōu)良基因，獲取優(yōu)良基因的速度更快，獲取優(yōu)良基因的幾率也更高，大大降低了有利于豬繁殖的基因篩選的難度，而且通過人工合成基因技術(shù)可以將獲取的產(chǎn)仔數(shù)多和抗病力強兩種優(yōu)良基因合成在一起，使兩種基因可以同時在豬繁殖系統(tǒng)內(nèi)進行遺傳，也使篩選出的基因更加有利于豬的繁殖。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物分子技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法。

背景技術(shù)

養(yǎng)豬業(yè)是我國農(nóng)業(yè)中的重要產(chǎn)業(yè)，對保障肉食品安全供應(yīng)有重要作用，目前我國養(yǎng)豬業(yè)正由傳統(tǒng)養(yǎng)豬業(yè)向現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)轉(zhuǎn)變，無論是養(yǎng)殖模式、區(qū)域布局還是生產(chǎn)方式、生產(chǎn)能力都在發(fā)生顯著變化，但仍然存在自主創(chuàng)新能力弱、食品安全問題突出、勞動力成本增高、原種依賴進口、疫病嚴重、環(huán)保壓力大、飼料資源匱乏等諸多挑戰(zhàn)，不過也有自主創(chuàng)新條件改善、國際市場空間大、國內(nèi)市場穩(wěn)步增長、政府支持力度大等機遇。

在養(yǎng)豬業(yè)中，母豬的總產(chǎn)仔數(shù)、仔豬均勻度、死胎數(shù)以及木乃伊胎數(shù)等繁殖性狀對母豬生產(chǎn)的經(jīng)濟效益具有重要意義，對母豬的繁殖性狀不斷進行改良提高母豬繁殖性能，在實際生產(chǎn)中顯得尤為重要，根據(jù)21世紀初部分學者的統(tǒng)計可以發(fā)現(xiàn)，隨著母豬的產(chǎn)仔數(shù)增加1頭，經(jīng)濟收益平均將增加100元左右。

繁殖性狀作為養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要經(jīng)濟性狀，其遺傳力較低，通過常規(guī)育種方法獲得有利于豬繁殖的優(yōu)良基因需要很長的時間，并且很難取得較大的遺傳進展。

發(fā)明內(nèi)容

（一）解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法，解決了常規(guī)育種方法篩選有利于豬繁殖的優(yōu)良基因需要很長時間，并且很難獲得優(yōu)良基因的問題。

（二）技術(shù)方案

為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：一種有利于豬繁殖的基因優(yōu)良篩選方法，其包括以下步驟：

S1 選取試驗材料

首先選取800頭蘇姜豬母豬作為試驗材料；

S2 采集DNA樣本

從每頭蘇姜豬母豬上提取耳組織的DNA樣本，分成等量的兩份，并在-20℃～-80℃條件下保存；

S3 獲取引物對

根據(jù)已知梅山豬產(chǎn)仔數(shù)多的基因進行聚類分析獲得第一引物對，同時根據(jù)已知長白豬抗病力強的基因進行聚類分析獲得第二引物對；

S4 PCR擴增

以提取的兩份DNA樣本為模板，分別利用第一引物對和第二引物的引導下進行PCR擴增得到兩份PCR擴增產(chǎn)物；

S5 多態(tài)性檢測

利用RFLP技術(shù)對兩份PCR擴增產(chǎn)物進行多態(tài)性序列分析，并統(tǒng)計分析結(jié)果以獲得蘇姜豬產(chǎn)仔數(shù)多的基因和抗病力強的基因；

S6 人工合成基因

利用基因重組的原理，將蘇姜豬產(chǎn)仔數(shù)多的基因和抗病力強的基因進行人工合成。

優(yōu)選的，所述PCR反應(yīng)體系為：Taq DNA聚合酶11.5μl，50ng/μl的DNA樣本模板1.5μl，10pmol/L的第一引物對或第二引物對1.0μl，再用超純水補充反應(yīng)體系至25μl。

優(yōu)選的，所述PCR反應(yīng)條件為：先95℃預變性4.5min，然后95℃變性30s，55.5℃退火30s，71℃延伸30s，進行35次循環(huán)，最后再71℃延伸4.5min。