[發明專利]一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法

在審

• 申請號: 202010315468.5
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111304292A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 朱淑斌;倪黎綱;徐盼;趙旭庭;高慧珍
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: C12Q1/6809
• 分類號: C12Q1/6809
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐卿

1.一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其包括以下步驟：

S1 選取試驗材料

首先選取800頭蘇姜豬母豬作為試驗材料；

S2 采集DNA樣本

從每頭蘇姜豬母豬上提取耳組織的DNA樣本，分成等量的兩份，并在-20℃～-80℃條件下保存；

S3 獲取引物對

根據已知梅山豬產仔數多的基因進行聚類分析獲得第一引物對，同時根據已知長白豬抗病力強的基因進行聚類分析獲得第二引物對；

S4 PCR擴增

以提取的兩份DNA樣本為模板，分別利用第一引物對和第二引物的引導下進行PCR擴增得到兩份PCR擴增產物；

S5 多態性檢測

利用RFLP技術對兩份PCR擴增產物進行多態性序列分析，并統計分析結果以獲得蘇姜豬產仔數多的基因和抗病力強的基因；

S6 人工合成基因

利用基因重組的原理，將蘇姜豬產仔數多的基因和抗病力強的基因進行人工合成。

2.根據權利要求1所述的一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其特征在于：所述PCR反應體系為：Taq DNA聚合酶11.5μl，50ng/μl的DNA樣本模板1.5μl，10pmol/L的第一引物對或第二引物對1.0μl，再用超純水補充反應體系至25μl。

3.根據權利要求1所述的一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其特征在于：所述PCR反應條件為：先95℃預變性4.5min，然后95℃變性30s，55.5℃退火30s，71℃延伸30s，進行35次循環，最后再71℃延伸4.5min。

4.根據權利要求1所述的一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其特征在于：所述RFLP反應體系為：8.0μl的PCR擴增產物，加入1.0μl的限制性內切酶，以及2.0μl的10×Buffer稀釋液，再用4.0μl的超純水補充反應體系至15μl，然后用水浴鍋在35℃～37℃條件下水浴加熱3.5h，最后再用2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結果。

5.根據權利要求1所述的一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其特征在于：所述800頭蘇姜豬母豬均為健康無疾病的實驗材料。

6.根據權利要求1所述的一種有利于豬繁殖的基因優良篩選方法，其特征在于：所述母豬繁殖形狀主要包括產仔數、有效活仔數、仔豬初生病變系數等。