[發(fā)明專利]基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法

有效

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• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111455068B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉永峰;申倩
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西師范大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責(zé)任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

本發(fā)明公開了一種基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法，該方法首先從羊肉中提取總RNA，然后針對轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)篩選出的功能基因，采用實時熒光定量PCR技術(shù)，對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，定量PCR擴增新鮮肉和冷藏過程中特定功能基因獲得其Ct值，進(jìn)而計算出特定基因的相對表達(dá)量，根據(jù)表達(dá)量判定一級鮮肉、二級鮮肉、三級鮮肉和不新鮮肉。本發(fā)明使用微量樣品從分子生物學(xué)水平監(jiān)測羊肉冷藏時間和新鮮程度，為后續(xù)肉品的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價和高品質(zhì)肉產(chǎn)品加工奠定了基礎(chǔ)，為羊肉新鮮度監(jiān)測提供了一種準(zhǔn)確、高效、快速的評價方法，有利于為肉品企業(yè)創(chuàng)造更多的利潤，應(yīng)用前景廣闊。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于肉制品質(zhì)量檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法。

背景技術(shù)

中國是世界上最大的羊肉生產(chǎn)國和消費國，羊肉制品因具有御寒、滋補等獨特優(yōu)勢在我國居民膳食中發(fā)揮著不可小覷的作用。當(dāng)今市場上生肉的消費形態(tài)通常為熱鮮肉、冷凍肉和冷鮮肉。熱鮮肉是指宰后畜禽不經(jīng)冷鮮加工，直接上市的生鮮肉，污染源復(fù)雜、貯藏期短；冷凍肉作為凍結(jié)食品因貯藏溫度低微生物活性受到抑制，衛(wèi)生且安全，但冷凍肉在解凍過程中出現(xiàn)的汁液流失、蒸煮損失和蛋白變性等現(xiàn)象，非常不利于產(chǎn)品風(fēng)味和營養(yǎng)特性的保持；冷鮮肉是指檢疫合格屠宰的胴體經(jīng)冷鮮排酸處理后，在食用之前始終保持在低溫狀態(tài)下的生鮮肉，冷鮮肉從屠宰到上市通常經(jīng)歷了僵直期到成熟期的轉(zhuǎn)變，肉質(zhì)得到極大改善，如今已成為我國肉類消費的主流，但如果長時間冷鮮，肌肉過成熟，腐敗微生物分解肉中營養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物，嚴(yán)重影響肉類品質(zhì)和風(fēng)味。

長期以來，研究者一般通過感官特性(包括顏色、滋味等)、食用品質(zhì)(包括硬度、嫩度、彈性等)、營養(yǎng)品質(zhì)(包括營養(yǎng)素含量、消化吸收率等)、衛(wèi)生指標(biāo)(包括pH值、TVB-N值、TBARS值、微生物、獸藥殘留等)等宏觀指標(biāo)來評判肉類品質(zhì)和貯藏期。然而，這些方法從表觀和化學(xué)物質(zhì)方面來研究肉類的方法檢測過程繁瑣、樣品用量較多且準(zhǔn)確度欠佳。因此，探究新型冷鮮羊肉新鮮度的檢測技術(shù)至關(guān)重要。近年來，利用蛋白組學(xué)探究動物宰后品質(zhì)變化及其調(diào)控機理也在逐步發(fā)展，通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)獲得特定功能基因用于分析相關(guān)性狀已逐漸成為畜禽類研究的重要途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行鑒別冷藏羊肉新鮮程度，提供一種基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)和實時熒光定量PCR技術(shù)高效、快速評價羊肉新鮮度方法。

針對上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案由下述步驟組成：

1、采集宰后生鮮羊肉和不同冷藏時間的羊肉樣品，提取鮮肉和冷鮮貯藏后羊肉樣品的總RNA。

2、根據(jù)羊β-globin基因序列設(shè)計特異性引物：

上游引物：5'-CGGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGGAAGGCCCATGGCAAGAAGG-3'

下游引物：5'-GCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGCTCACTCAGCGCAGCAAAGG-3'

同時，設(shè)計并合成羊LOC102172960、LOC108633460和FAM110D基因的特異性引物：

LOC102172960上游引物：5'-TCGACCCCTTACGCTTTTCT-3'

LOC102172960下游引物：5'-TTTGAGGGATCCGGGGAAAA-3'

LOC108633460上游引物：5'-GGACCATGCACACAGGATTC-3'

LOC108633460下游引物：5'-TGTAAGGGCAGAAGAAGGGG-3'

FAM110D上游引物：5'-TGGCAAAGTTGAGGAAGTGC-3'

FAM110D下游引物：5'-AATGGGCAGCAAAACTCCAG-3'