[發(fā)明專利]基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010315247.8
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111455068B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發(fā)明（設計）人: 劉永峰;申倩
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法，其特征在于由以下步驟組成：

(1)采集宰后生鮮羊肉和不同冷藏時間的羊肉樣品，提取鮮羊肉和冷藏后羊肉樣品的總RNA；

(2)根據(jù)羊β-globin基因序列設計并合成特異性引物：

上游引物：5'-CGGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGGAAGGCCCATGGCAAGAAGG-3'

下游引物：5'-GCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGCTCACTCAGCGCAGCAAAGG-3'

同時，設計并合成羊LOC102172960、LOC108633460和FAM110D基因的特異性引物：

LOC102172960上游引物：5'-TCGACCCCTTACGCTTTTCT-3'

LOC102172960下游引物：5'-TTTGAGGGATCCGGGGAAAA-3'

LOC108633460上游引物：5'-GGACCATGCACACAGGATTC-3'

LOC108633460下游引物：5'-TGTAAGGGCAGAAGAAGGGG-3'

FAM110D上游引物：5'-TGGCAAAGTTGAGGAAGTGC-3'

FAM110D下游引物：5'-AATGGGCAGCAAAACTCCAG-3'

(3)以β-globin為內(nèi)參基因，對步驟(1)獲得的RNA進行逆轉(zhuǎn)錄后對LOC102172960基因、LOC108633460基因和FAM110D基因進行實時熒光定量PCR擴增及檢測，獲得基因的Ct值，采用2^-△△Ct＝2^{-((Ct對照-Ctβ-globin)-(Ct試驗-Ctβ-globin))}法計算基因的相對表達量，判斷羊肉新鮮程度：如果LOC102172960基因的2^-△△Ct值小于等于0.56、LOC108633460基因的2^-△△Ct值小于等于1.53、FAM110D基因的2^-△△Ct值小于等于1.10，冷藏羊肉為一級鮮肉；如果LOC102172960基因的2^-△△Ct值為0.56＜2^-△△Ct≤0.80、LOC108633460基因的2^-△△Ct值為1.53＜2^-△△Ct≤1.65、FAM110D基因的2^-△△Ct值為1.10＜2^-△△Ct≤1.61，冷藏羊肉為二級鮮肉；如果LOC102172960基因的2^-△△Ct值為0.80＜2^-△△Ct≤2.54、LOC108633460基因的2^-△△Ct值為1.65＜2^-△△Ct≤1.74、FAM110D基因的2^-△△Ct值為1.61＜2^-△△Ct≤2.94，冷藏羊肉為三級鮮肉；如果LOC102172960基因的2^-△△Ct值大于2.54、LOC108633460基因的2^-△△Ct值大于1.74、FAM110D基因的2^-△△Ct值大于2.94，冷藏羊肉為不新鮮肉，而且2^-△△Ct值越大，變質(zhì)越嚴重。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法，其特征在于：所述的羊肉為山羊肉，且冷藏溫度為2～4℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR擴增的條件為：95℃，預變性5min；94℃，變性30s，60℃，退火60s，72℃，延伸60s，40個循環(huán)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于功能基因鑒別冷藏羊肉新鮮程度的方法，其特征在于：所述的LOC102172960基因、LOC108633460基因和FAM110D基因都是通過轉(zhuǎn)錄組學技術篩選出來的差異基因。