[發明專利]一種添加分子標簽的多重PCR方法及建庫儀器在審
| 申請號： | 202010314691.8 | 申請日： | 2020-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN111379033A | 公開（公告）日： | 2020-07-07 |
| 發明（設計）人： | 徐飛岳;王堰匯;緱靈山 | 申請（專利權）人： | 深圳易倍科華生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C12N15/10 |
| 代理公司： | 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367 | 代理人： | 鐘文翰 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市寶安區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 添加 分子 標簽 多重 pcr 方法 儀器 | ||
1.一種添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述方法包括：
步驟S10：選擇基因組位點或DNA區域作為DNA模板并進行引物組設計；
步驟S20：對所述引物組添加對應的分子標簽；
步驟S30：使用所述引物組以及通用引物對所述DNA模板進行第一輪多重PCR擴增，得到第一產物；
步驟S40：對所述第一產物進行第一純化處理和切割不匹配分子標簽處理，以得到第二產物；
步驟S50：使用通用引物對所述第二產物進行第二輪多重PCR擴增并添加索引，以得到第三產物；
步驟S60：對所述第三產物進行第二純化處理，以得到文庫。
2.根據權利要求1所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述引物組設計的引物形式包括常規單鏈引物、發夾引物和歐米伽引物中的任意一種或多種。
3.根據權利要求1所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述第一輪多重PCR擴增反應包括3個循環。
4.根據權利要求1所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述步驟S40包括：
步驟S410：對所述第一產物加入純化磁珠，洗滌純化后加入適量去離子水溶解；
步驟S420：加入錯配修復系統修復酶反應切割不匹配的分子標簽，以得到第二產物。
5.根據權利要求4所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述第一純化的純化磁珠的加入比例是0.8-1.5。
6.根據權利要求4所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述錯配修復系統修復酶包括Mut家族蛋白、hMSH2、hMLH1蛋白和T7核酸內切酶I(T7EndonucleaseI，T7E-I)中的任意一種或多種。
7.根據權利要求4所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述步驟S40還包括加入核酸外切酶去除多余引物。
8.根據權利要求1所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述第二輪多重PCR擴增反應包括8-25個循環。
9.根據權利要求1所述的添加分子標簽的多重PCR方法，其特征在于，所述第二純化是加入純化磁珠，洗滌純化后加入適量去離子水溶解；所述第二純化的純化磁珠的加入比例是0.8-1.2。
10.一種建庫儀器，其特征在于，所述建庫儀器包括如權利要求1至9所述的添加分子標簽的多重PCR方法。
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