[發(fā)明專利]Reg3β/ HMGB1環(huán)路調(diào)控EAM小鼠巨噬細(xì)胞再編程的實驗方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010314514.X
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111381050B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵曉軼;王守衛(wèi);金曉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

本發(fā)明提供一種Reg3β/HMGB1環(huán)路調(diào)控EAM小鼠巨噬細(xì)胞再編程的實驗方法，包括如下步驟：（1）體外研究Reg3β對EAM小鼠心肌浸潤巨噬細(xì)胞再編程及分泌HMGB1的影響及機(jī)制；（2）體外研究HMGB1對心肌細(xì)胞去分化、增殖及Reg3β釋放的影響及機(jī)制；（3）體內(nèi)驗證Reg3β/Nsubgt;2/subgt;?HMGB1環(huán)路調(diào)控巨噬細(xì)胞再編程參與EAM小鼠受損心肌修復(fù)的作用和機(jī)制。本發(fā)明首次提出EAM時心肌細(xì)胞與浸潤Mφ通過Reg3β/Nsubgt;2/subgt;?HMGB1環(huán)路相互作用，形成正反饋調(diào)節(jié)，促進(jìn)Mφ再編程，參與受損心肌修復(fù)，為全面了解巨噬細(xì)胞在心肌炎發(fā)生和轉(zhuǎn)歸過程中的作用奠定基礎(chǔ)，也為臨床治療心血管疾病提供新的思路和靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種Reg3β/?HMGB1環(huán)路調(diào)控EAM小鼠巨噬細(xì)胞再編程的實驗方法。

背景技術(shù)

心肌炎是指心肌中有局限性或彌漫性的炎性病變，可由病毒感染、物理、化學(xué)等多種因素引起。近年來心肌炎發(fā)病率不斷增加，病情輕重不等，表現(xiàn)差異很大，嬰幼兒病情多較重，成年人多較輕。輕者可無明顯病狀，重者可并發(fā)嚴(yán)重心律失常、心功能不全、心源性休克或心力衰竭甚至是心臟猝死，嚴(yán)重威脅人類的身心健康。因此，闡明心肌炎的炎癥損傷及其受損心肌功能重塑的機(jī)制，對于積極預(yù)防心肌炎的發(fā)生、提高人民生活質(zhì)量具有重要意義；同時為開展以心肌功能重塑為目的免疫治療奠定基礎(chǔ)。由柯薩奇病毒或心肌球蛋白α鏈（MyHC-α）誘導(dǎo)產(chǎn)生的實驗性自身免疫性心肌炎（experimental?autoimmune?myocarditis，EAM）是研究這一疾病的有效模型。

心肌炎是炎癥導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死、釋放高遷移率族蛋白B1（high?mobility?groupbox?1，HMGB1）等損傷相關(guān)的分子模式，激活心臟定居免疫細(xì)胞，如肥大細(xì)胞等，導(dǎo)致單核/巨噬細(xì)胞（macrophages，Mφ）在心肌組織中大量浸潤，參與心肌炎的發(fā)生、發(fā)展。有研究表明心肌浸潤Mφ通過在局部微環(huán)境下的再編程參與心肌損傷、心肌細(xì)胞再生與心肌功能重塑三個階段，然而調(diào)控心臟Mφ再編程的微環(huán)境因素目前仍不完全清楚。Mφ是高度異質(zhì)性的細(xì)胞群體，分布廣泛，可塑性強(qiáng)，功能具有多樣性，在維持體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、促進(jìn)組織器官發(fā)育、參與受損組織修復(fù)、抵抗病原微生物感染及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮不同的作用。根據(jù)存在部位和功能表型的差異，可將Mφ分為兩類:?炎性Mφ（inflammatory?macrophages，iMφ）和組織定居Mφ（tissue?resident?macrophages，ResMφ）。兩類Mφ具有不同的組織來源與發(fā)育路徑：iMφ是短壽命的細(xì)胞群體，主要由外周循環(huán)中的Ly6Chi單核細(xì)胞分化而來，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥或組織器官受損時，被招募至炎癥部位，并在局部微環(huán)境的作用下分化、發(fā)育，從而發(fā)生抗感染免疫效應(yīng)；ResMφ主要起源于胚胎時期的卵黃囊（yolk?sac，YS）（表型為Ly6C-），少數(shù)來源于胎肝以及外周循環(huán)中的單核細(xì)胞（表型均為Ly6Chi），并且ResMφ定居器官的微環(huán)境也可調(diào)控其發(fā)育，心臟穩(wěn)態(tài)時，ResMφ主要通過Ly6C-Mφ增殖維持自我更新，隨著年齡的增加Ly6C-Mφ增殖能力下降，主要依賴招募Ly6Chi單核細(xì)胞維持更新；在此過程中，Ly6ChiMφ逐步取代Ly6C-Mφ，致使受損組織修復(fù)功能減弱。

各組織巨噬細(xì)胞互不相同，具有不同的轉(zhuǎn)錄譜和功能。大量的研究表明組織功能需求信號調(diào)控Mφ的分化、發(fā)育，是決定Mφ表型與功能的重要因素。在EAM發(fā)生發(fā)展的過程中，局部微環(huán)境隨之呈現(xiàn)不同的變化，不斷促進(jìn)Mφ功能與表型的再編程，相繼成為炎癥Mφ（M1）、炎癥消退Mφ（M2）和組織修復(fù)Mφ（M2），從而參與心肌的炎癥發(fā)生、炎癥消退、修復(fù)與再生等過程。因此，闡明Mφ在心肌炎局部微環(huán)境下的再編程機(jī)制是有效控制和延緩心肌損傷的重要途徑。