[發(fā)明專利]一種測定禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物殘留量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010311449.5
• 申請日: 2020-04-20
• 公開（公告）號: CN111650310A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝繼安;劉柏林;趙紫微;吳翠玲
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省疾病預(yù)防控制中心（省健康教育所）
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

一種測定禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物殘留量的方法，本發(fā)明建立超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC?MS/MS)法檢測禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物的殘留量。樣品經(jīng)酶解，三氯乙酸沉淀蛋白，低溫高速離心，上清液調(diào)節(jié)pH值后經(jīng)PBA/PCX復(fù)合固相萃取柱凈化，Agilent ZORBAX SB?Aq柱(3.0mm×100mm，1.8μm)分析利巴韋林，Waters BEH C₁₈色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)分析金剛烷胺類，串聯(lián)質(zhì)譜測定，同位素內(nèi)標法定量。本方法具有簡便快捷、靈敏度高、定性準確等特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種測定禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物殘留量的方法。

背景技術(shù)

利巴韋林(ribavirin)，又稱病毒唑，是廣譜強效的合成核苷類抗病毒藥物，對DNA和RNA病毒有抑制作用，主要用于人類病毒性感冒、肺炎、甲型肝炎和病毒性腦炎等疾病的治療。金剛烷胺類化合物主要有金剛烷胺(amantadine)、金剛烷甲胺(adamantanemethylamine)、金剛烷乙胺(rimantadine)和3,5-二甲基金剛胺(memantine)，其中金剛烷胺主要用于抑制亞洲甲型流感病毒；金剛烷甲胺抗A2型病毒、副流感病毒的效果優(yōu)于金剛烷胺；金剛烷乙胺抑制A型流感病毒的作用也強于金剛烷胺，但中樞神經(jīng)副作用弱于金剛烷胺；3,5-二甲基金剛胺又稱美金剛，臨床上常用于中、重度治療阿爾茨海默病，但其具有金剛烷胺的類似結(jié)構(gòu)，也具有抑制甲型流感病毒作用。

由于畜牧養(yǎng)殖環(huán)節(jié)濫用利巴韋林和金剛烷胺類化合物，藥物殘留會導(dǎo)致病毒耐藥性，通過食物鏈對人體健康產(chǎn)生危害，存在較大的安全風險，我國原農(nóng)業(yè)部于2005年頒布的第560號公告中明令禁止利巴韋林和金剛烷胺類化合物等抗病毒藥物用于畜禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)也于2006年禁止將人類抗病毒藥物用于畜禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)。2012年我國爆出“速生雞”事件，媒體曝光了部分養(yǎng)殖場違規(guī)喂食利巴韋林和金剛烷胺等抗病毒藥物，引起了較大的社會反響。由于利巴韋林和金剛烷胺類化合物等抗病毒藥物價格低廉，效果好，仍然有養(yǎng)殖環(huán)節(jié)將此類藥物用于動物疾病的預(yù)防和治療。

由于利巴韋林在生物體內(nèi)代謝成磷酸化利巴韋林，分析利巴韋林總殘留量時需要將磷酸化利巴韋林轉(zhuǎn)化成游離態(tài)的利巴韋林，而金剛烷胺類化合物在生物體內(nèi)幾乎以原型形式存在。目前我國對動物源性食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物總殘留量檢測的相關(guān)研究報道較少，大多采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測利巴韋林或金剛烷胺類化合物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種測定禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物殘留量的方法。

為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種測定禽類食品中利巴韋林和金剛烷胺類化合物殘留量的方法，包括下列步驟：

步驟1：將樣品置于離心管中，加入混合同位素內(nèi)標工作液，加入乙酸銨緩沖液和酸性磷酸酶溶液，蓋緊蓋子，漩渦混勻30s，于37℃恒溫搖床中避光酶解2h得到酶解液，然后向所述酶解液中4ml質(zhì)量分數(shù)為5％的三氯乙酸溶液，漩渦混勻30s，2℃條件下以10000r/min離心10min，然后移取上清液于另一離心管中，用質(zhì)量分數(shù)為5％的氨水溶液調(diào)節(jié)溶液pH值為8.4-8.6，用水定容至10ml，混勻后以10000r/min離心5min，上清液過0.45μm再生纖維素微孔濾膜，得到樣品提取液；