[發明專利]一種超靈敏檢測單增李斯特菌的膠體金免疫層析試劑盒

在審

• 申請號: 202010310111.8
• 申請日: 2020-04-17
• 公開（公告）號: CN111505280A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 黃小林;熊勇華;周耀鋒;冷遠逵;陳靜;付金梅
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/52;G01N21/31
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 許瑩瑩

本發明涉及免疫層析分析技術領域，具體涉及一種超靈敏檢測單增李斯特菌的膠體金免疫層析試劑盒，所述試劑盒由膠體金免疫層析試紙條和比色信號放大試劑組成，所述試紙條采用雙抗體夾心法檢測單增李斯特菌；所述比色信號放大試劑由金生長A液和金生長B液組成，金生長A液為聚合物和三價金離子(Au³⁺)混合的配位生長液，金生長B液為對苯二酚和檸檬酸三鈉混合的溶液。本發明具有操作簡單、靈敏度高、穩定性好、檢測速度快、結果易讀，且無需其他輔助儀器設備，可用于臨床和突發事件的現場快速超靈敏檢測以及大規模的流行病學調查。

技術領域

本發明涉及免疫層析分析技術領域，具體涉及一種超靈敏檢測單增李斯特菌的膠體金免疫層析試劑盒。

背景技術

膠體金免疫層析試紙條因其簡單、快速、方便以及裸眼檢測已被廣泛應用于臨床診斷、食品安全檢測以及環境監控等領域。傳統膠體金免疫層析試紙條主要采用粒徑為20～40nm膠體金作為信號探針，然而由于其較小的粒徑導致其比色信號強度相對偏弱，進而導致其檢測靈敏度偏低。相對較低的檢測靈敏度在一定程度上局限了其在超靈敏檢測中的應用。近些年，隨著納米科學和技術的快速發展，各種各樣的新型納米材料如熒光微球、量子點、量子點微球、上轉換熒光納米粒子、碳納米材料以及磁性材料已經被報道可用于替代膠體金作為檢測探針提高傳統免疫層析試紙條的檢測靈敏度，但這些納米探針的合成相對復雜，價格昂貴很難被市場推廣使用。相對于這些新型納米材料，膠體金因其合成簡單、易修飾、生物相容性好、光學性質穩定以及易讀取等優勢一直以來在免疫層析試紙條占據主要的位置，特別是在商業化生產中，其市場占有率達90％以上。因此，如何提高傳統膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度對于進一步拓展其在超靈敏檢測中的應用具有重要意義。

基于試紙條檢測線信號放大策略因無需合成額外的輔助信號放大材料，因而得到了科研工作者的廣泛關注。該類策略主要包括以下幾類：1)雙金信號放大技術：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，通過引入信號擴增金標墊，其可以借助抗原抗體反應和生物素-鏈霉親和素系統等特異性地在檢測線結合金標抗體偶聯物，導致膠體金納米粒子的進一步聚集，從而放大膠體金的比色信號，如專利CN102507929A；2)酶增強技術：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，通過引入辣根過氧化物酶或具有過氧化物酶活性的納米酶催化氧化相應的底物如四甲基聯苯胺(TMB)等生成有色的沉淀物沉積于檢測線，從而使膠體金的比色信號得到放大；3)金或銀染增強技術：在傳統膠體金免疫層析試紙條的基礎上，當還原劑存在的情況下，金或銀離子容易以膠體金為核心，聚集在膠體金表面還原成金或銀原子，使納米級大小的膠體金通過金或銀離子的聚集和還原生長為更大的顆粒，從而使膠體金的比色信號得到放大，如專利CN102135536A。前兩種方法由于需要對膠體金探針進行雙標記，往往容易影響膠體金探針的免疫性能，導致方法學穩定性差。金或銀染增強技術中金屬納米殼層的生長屬于層層生長模式，其生長速率不僅與試紙條T、C線上金納米粒子數量有關，而且與生長液的濃度以及生長時間密切相關，導致生長過程不可控，檢測結果的穩定性和重現性差，大大限制了該方法在實踐中的推廣應用。此外這些方法提高檢測靈敏度的能力是有限的，僅為1～2個數量級。因此增敏后的膠體金免疫層析試紙條依然無法實現低濃度待檢物的超靈敏檢測。本發明提出使用聚合物介導可控金生長技術顯著增強試紙條檢測線上膠體金探針的光學信號強度，條帶顏色呈現從無到有、從弱到強的變化，可實現超低目標物濃度下的裸眼定性檢測。經檢索未見有采用可控金生長技術增敏傳統膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的公開文獻報道。

發明內容

本發明旨在針對現有膠體金免疫層析試紙條因膠體金探針信號強度偏弱導致檢測靈敏度偏低的現狀缺陷，提供了一種提高傳統膠體金免疫層析方法檢測靈敏度的新技術，實現對超低濃度目標檢測物進行現場快速檢測。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：