[發明專利]一種血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法

有效

• 申請號: 202010304364.4
• 申請日: 2020-04-17
• 公開（公告）號: CN111337612B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 汪瀟;周維晨;劉靜靜;張敬梅;汪春彥;邱寧
• 申請（專利權）人: 合肥諾明藥物安全研究有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙) 34119
• 代理人: 劉勇

1.一種血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS法檢測；其中，HPLC-MS/MS法的高效液相色譜條件為：色譜柱為ACE Excel C18-AR色譜柱，流動相A為甲酸、甲醇和水的混合溶液，其中，甲醇和水的體積比為70:30，甲酸的體積分數為0.01-0.2％；流動相B為甲醇，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序為：0-2.3min內，流動相A的比例維持100％；2.3-2.5min內，100％流動相A漸變為100％流動相B；2.5-4.2min內，流動相B的比例維持100％；4.2-4.5min內，100％流動相B漸變為100％流動相A，4.5-5min內，流動相A的比例維持100％；

HPLC-MS/MS法的質譜條件為：離子源為ESI離子源；檢測方式為正離子檢測；掃描方式為SRM；接口電壓為4.5kV；傳輸毛細管溫度為250-375℃；吹掃氣流量為10units；輔助氣流量為10units；鞘氣流量為30units、碰撞氣流量為1unit；

具體包括以下步驟：用HYA13369標準品和空白基質配制標準曲線樣品，經液液萃取處理后進樣，并繪制標準曲線獲得線性回歸方程，再取待測樣品，經液液萃取處理后進樣，通過線性回歸方程計算血漿和組織中HYA13369的濃度；

所述液液萃取的具體步驟為：取標準曲線樣品或待測樣品50μL，加入5μL體積分數為1％的甲酸水溶液渦旋混勻，然后靜置2min，加入50μL內標工作溶液渦旋混勻，再加入600μL乙酸乙酯渦旋混勻，接著離心，取上清液450μL于96孔板中，用N₂吹干，用200μL流動相A復溶，再離心取上清液即可。

2.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，高效液相色譜條件中，色譜柱的規格為50×3.0mm，粒徑為3μm。

3.根據權利要求1或2所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，高效液相色譜條件中，流動相A中，甲酸的體積分數為0.1-0.2％。

4.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，高效液相色譜條件中，進樣量為5-20μL；高效液相色譜條件中，血漿的進樣量為20μL，組織的進樣量為5μL。

5.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，高效液相色譜條件中，流速為0.45-0.55mL/min；高效液相色譜條件中，柱溫為35-45℃；高效液相色譜條件中，進樣器溫度為2-8℃。

6.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，內標工作溶液的濃度為10μg/mL；內標工作溶液的配制方法為：用甲醇溶解內標物得到濃度為1mg/mL的內標儲備液，取內標儲備液，用乙酸乙酯稀釋即得；內標物為厄貝沙坦。

7.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，空白基質為空白血漿或空白組織；空白血漿為健康的人或動物的全血經EDTA-K2抗凝、分離后的血漿，于-80℃冰箱保存，臨用前在室溫條件下自然解凍即得；空白組織為健康的人或動物的組織經15倍重的生理鹽水勻漿，于-80℃冰箱保存，臨用前在室溫條件下自然解凍即得。

8.根據權利要求1所述血漿和組織中HYA13369濃度的定量分析方法，其特征在于，待測樣品為待測血漿或待測組織；待測血漿為使用HYA13369制劑后的人或動物的全血經EDTA-K2抗凝、分離后的血漿，于-80℃冰箱保存，臨用前在室溫條件下自然解凍即得；待測組織為使用HYA13369制劑后的人或動物的組織經15倍重的生理鹽水勻漿，于-80℃冰箱保存，臨用前在室溫條件下自然解凍即得。