[發明專利]一種豬神經介素B多肽及其多克隆抗體制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010300493.6
• 申請日: 2020-04-16
• 公開（公告）號: CN111499721B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 馬志禹;許艷;劉德鵬;楊瑞琪;郭軍培
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K19/00;C07K16/26;C07K16/06;G01N33/74
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 劉妍妍

本發明屬于生物化學和分子免疫學領域，涉及一種豬神經介素B多肽及其多克隆抗體制備方法和應用，本發明將豬神經介素B多肽的C端修飾多肽與載體蛋白鑰孔戚血藍蛋白KLH耦聯，獲得NMB修飾多肽?KLH耦聯蛋白；乳化NMB修飾多肽?KLH耦聯蛋白并免疫新西蘭大白兔；收集、分離得到含有兔抗豬NMB修飾多肽抗體的血清；采用Protein G純化柱法對制備的NMB多克隆抗體進行純化。該多肽抗原和多克隆抗體，具有制備方法簡單、成本低、效價高的特點，并能夠特異性結合豬組織中的NMB蛋白。

技術領域

本發明屬于生物化學和分子免疫學領域，涉及一種豬神經介素B多肽及其抗體制備方法和應用，所制備的抗體主要用于天然蛋白抗原的檢測，具體是一種兔抗豬神經介素B多肽多克隆抗體的制備方法。

背景技術

神經介素B(Neuromedin B，NMB)是1983年從豬脊髓中分離純化的一種神經肽，為哺乳動物蛙皮素(Bombesin，BN)樣肽家族中的一員。在體內，NMB通過與細胞膜表面的受體(NMBR或BB1)結合發揮多種生物學作用，包括：刺激平滑肌收縮，調節胃腸道運動、攝食和體溫，調控激素分泌，介導應激和恐懼反應，影響行為和記憶，促進細胞生長，調節生殖等。

自NMB發現以來，國內外研究者對人、大鼠、小鼠等動物NMB及其受體在體內的表達和分布進行了大量的研究，發現NMB及其受體廣泛表達于中樞神經系統和外周組織器官。豬是我國主要的經濟家畜和人們動物蛋白的主要來源之一，也是一種重要的模型動物，保證豬的健康，提高豬的生產性能和繁殖能力，是畜牧獸醫工作的重要責任，也為進一步研究人類疾病提供重要的參考價值。通過對豬NMB序列進行分析，我們發現豬NMB包括：24個氨基酸的信號肽、保守序列NMB-32和NMB-10(GNLWATGHFM)，這與人、大鼠和小鼠相同。另外，同源性比對結果表明豬NMB核苷酸和氨基酸序列與其他哺乳動物存在較高的同源性。通過熒光定量PCR我們發現NMB mRNA也廣泛表達于豬的中樞神經系統和多種外周組織器官中，表明NMB可能作為神經遞質或神經介質在豬中樞或外周組織器官中發揮作用。但是，由于市場上檢測豬NMB蛋白抗體的缺乏，而且制備豬NMB單克隆抗體過程復雜、成本高、耗時長，使得NMB在豬體內的研究主要集中在基因水平，嚴重制約了NMB在豬上的功能研究。因此，制備用于豬NMB蛋白的抗體就顯得特別重要，既能用于研究GRP在豬體內的生理功能，又能彌補市場上對此抗體的需求。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種豬神經介素B多肽及其多克隆抗體制備方法和應用，該多肽抗原和多克隆抗體，具有制備方法簡單、成本低、效價高的特點，并能夠特異性結合豬組織中的NMB蛋白。

為實現上述發明目的，本發明通過以下技術方案得以實現：

根據豬NMB蛋白全長氨基酸序列如序列列表SEQ-1，利用生物信息學相關軟件選擇一種豬NMB多肽抗原如序列列表SEQ-2。

本發明提供一種豬神經介素B多肽，序列如序列列表SEQ-2所示。

本發明提供一種豬神經介素B多肽，序列如序列列表SEQ-3所示。

SEQ-1，分子類型及特征：NMB蛋白全長氨基酸序列，長度為121aa；

序列為：