[發(fā)明專利]一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒及其制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010285672.7
• 申請(qǐng)日: 2020-04-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111273018A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫凱;馬立才;劉河冰;聶靖東;邢維維;劉薇;楊柳;丁亞芳;崔乃元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括：溴敵隆檢測(cè)酶標(biāo)板、溴敵隆系列標(biāo)準(zhǔn)品工作液、溴敵隆抗體工作液、酶標(biāo)記物工作液、樣品稀釋液、樣品提取液、洗滌液、底物顯色液、終止液組成，其特征在于：

所述溴敵隆酶標(biāo)板由溴敵隆藥物半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物包被制成，溴敵隆半抗原為式I所示化合物：

式I

所述溴敵隆抗體為溴敵隆藥物的特異性抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述溴敵隆半抗原的制備方法包括如下步驟：稱取500mg溴敵隆用6 mL吡啶溶解，加入鄰苯二甲酸酐154.45 mg，加熱至60℃攪拌，純化，旋干，終止反應(yīng)，得到式I所述化合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述溴敵隆藥物的特異性抗體為所述溴敵隆單克隆抗體，所述溴敵隆單克隆抗體由重鏈和輕鏈組成，所述重鏈的可變區(qū)的氨基酸序列可如序列表的序列1所示，所述輕鏈的可變區(qū)的氨基酸序列可如序列表的序列2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述溴敵隆抗體工作液為將溴敵隆的單克隆抗體用抗體稀釋液稀釋1000倍，獲得含有溴敵隆藥物的單克隆抗體的抗體工作液；

所述抗體稀釋液為含有Proclin 300、Triton X-100的PBS緩沖液；所述抗體稀釋液的溶劑為去離子水，溶質(zhì)為無(wú)水磷酸氫二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、氯化鉀、Proclin300和Triton X-100，所述溶質(zhì)在所述PBS緩沖液中的濃度分別為1.072 g/L、0.59 g/L、8.5g/L、0.4 g/L、200 μL/L和500 μL/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)記物工作液為將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗溴敵隆藥物單克隆抗體的抗抗體用抗抗體稀釋液稀釋500倍獲得的；

所述抗抗體稀釋液為含有小牛血清、Proclin 300的PBS緩沖液；所述抗體稀釋液的溶劑為去離子水，溶質(zhì)為無(wú)水磷酸氫二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、氯化鉀、小牛血清和Proclin 300，所述溶質(zhì)在所述PBS緩沖液中的濃度分別為1.072 g/L、0.6 g/L、16 g/L、0.4g/L、50 mL/L和200 μL /L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)溴敵隆的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：所述溴敵隆系列標(biāo)準(zhǔn)品工作液為6種溴敵隆標(biāo)準(zhǔn)品工作液，所述溶液的溶劑為含有光穩(wěn)定劑、牛血清白蛋白的PBS緩沖液，溶質(zhì)為溴敵隆；所述溶質(zhì)在所述6種標(biāo)準(zhǔn)品工作液中的濃度分別為0 μg/L、0.15 μg/L，0.45 μg/L、1.35 μg/L、4.05 μg/L、12.15 μg/L；所述PBS緩沖液的溶劑為去離子水，溶質(zhì)為十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、光穩(wěn)定劑和牛血清白蛋白，所述溶質(zhì)在所述PBS緩沖液中的濃度分別為2.68 g/L、0.1 g/L、4 g/L、0.1 g/L、0.2 g/L和0.1 g/L，pH值為7.2。