[發明專利]一種轉氨酶催化劑和一種酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法

有效

• 申請號: 202010278857.5
• 申請日: 2020-04-10
• 公開（公告）號: CN111411096B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 李一軍;王子坤;黃勇開;王吉勇;馬克·博科拉;蔡寶琴;陳海濱;胡虎;余夢嬌;劉思彤
• 申請（專利權）人: 寧波酶賽生物工程有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12P41/00;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 浙江素豪律師事務所 33248
• 代理人: 楊璇

本發明涉及醫藥中間體技術領域，具體涉及一種轉氨酶催化劑，還涉及一種酶催化合成(R)?1?萘乙胺的方法，其包括以下步驟：向反應容器中加入表達所述轉氨酶催化劑的重組大腸桿菌濕菌體和1?萘乙酮，水浴加熱，并機械攪拌；邊攪拌邊加入有機溶劑或水，氨基供體和磷酸吡哆醛的水溶液；反應結束后，后處理，即得所述(R)?1?萘乙胺。本發明所述的轉氨酶催化劑，易于獲得，手性選擇性高；同時，本發明所述的酶催化合成(R)?1?萘乙胺的方法操作簡單，反應條件溫和，反應結束穩定，能夠直接生成(R)?1?萘乙胺，其光學純度在99％以上，從而避免了繁瑣的化學拆分步驟與冗長的化學反應路線。

技術領域

本發明涉及醫藥中間體技術領域，具體涉及一種轉氨酶催化劑，還涉及一種酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法。

背景技術

光學純的(R)-1-萘乙胺是一種重要的醫藥中間體，其制備方法通常包括：以萘乙酮為原料，加氨水生成亞胺，然后在高溫高壓條件下加氫得到消旋的萘乙胺，進一步實施化學手性拆分：以手性的天冬氨酸或酒石酸為手性拆分劑，加溶劑加熱條件下，形成對映體鹽；再利用對映體鹽溶解度的不同進行拆分，分離并制備R構型和S構型兩種構型的萘乙胺。可見，萘乙胺的拆分過程需用到大量有機試劑，堿性物質，產生大量廢水，通常一次性拆分R構型產物ee值可達到98％以上，收率達30％以上。

現有工藝中，萘乙胺的合成步驟冗長，例如包含萘乙酮加氨水生成亞胺，高溫高壓加氫，拆分等步驟。其中，氨水氣味大，存在環境污染問題；而高溫高壓加氫則對設備要求高，存在安全隱患；手性拆分收率不高，從而導致工業生產成本較高。

因此，亟需提供一種酶法合成(R)-1-萘乙胺的方法，以期在溫和的反應條件下，制得高光學純度的目標產物。

發明內容

針對現有技術中存在的種種技術缺陷，本發明旨在提供一種全新的轉氨酶催化劑，同時提供一種酶法合成(R)-1-萘乙胺的方法，其操作簡單，反應條件溫和，反應結束穩定，無需化學拆分，能夠直接生成(R)-1-萘乙胺。

具體地，本發明第一方面提供了一種轉氨酶催化劑，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述轉氨酶催化劑的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，具體見下表1：

表1轉氨酶催化劑的核苷酸序列與氨基酸序列

同時，本發明第二方面提供了一種酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其反應方程式為：

其中，在磷酸吡哆醛和轉氨酶催化劑的存在下，作為反應底物的1-萘乙酮與氨基供體反應生成(R)-1-萘乙胺；

其中，所述轉氨酶催化劑的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述轉氨酶催化劑的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

優選地，上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法具體包括以下步驟：

S1：向反應容器中加入表達所述轉氨酶催化劑的重組大腸桿菌濕菌體和1-萘乙酮，水浴加熱，并機械攪拌；

S2：邊攪拌邊加入有機溶劑或水，氨基供體和磷酸吡哆醛的水溶液；

S3：反應結束后，后處理，即得所述(R)-1-萘乙胺。

優選地，上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法具體包括以下步驟：

S1：向反應容器中加入表達所述轉氨酶催化劑的重組大腸桿菌濕菌體和1-萘乙酮，水浴加熱，并機械攪拌；

S2：邊攪拌邊加入有機溶劑，氨基供體和磷酸吡哆醛的水溶液；

S3：反應結束后，減壓蒸餾，以去除有機溶劑和過量的氨基供體；